[发明专利]AQP1过表达质粒及其在影响乳腺癌细胞耐药性上的用途

说明书

技术领域

本发明涉及DNA重组技术，具体涉及一种AQP1过表达质粒及其在影响乳腺癌细胞耐药性上的用途。

背景技术

水通道蛋白（aquaporins, AQPs）是一类小分子跨膜蛋白，广泛分布于原核生物和真核生物的细胞膜中，能够介导水和其他溶质小分子的快速跨膜转运。水通道蛋白家族共有13个成员，即AQP0-AQP12，可以被划分为3大类：（1）传统水通道蛋白，包括AQP0，AQP1，AQP2，AQP4，AQP5，AQP6和AQP8，这类水通道蛋白只对水有渗透性；（2）甘油水通道蛋白，包括AQP3，AQP7，AQP9和AQP10，这类蛋白不止对水分子有通透作用，还对甘油，尿素和一些单羧酸盐有通透作用；（3）超水通道蛋白，包括AQP11和AQP12，该类蛋白质存在于细胞质中，可能参与细胞内的水转运、细胞器体积和内囊体水平衡的调节。水通道蛋白广泛分布于泌尿系统，消化系统，呼吸系统和神经系统，参与调节尿液浓缩和稀释，腺体分泌，脂肪代谢，脑脊液形成，神经信号传导等，AQPs功能失常与多种疾病相关，比如肾性尿崩症，脑水肿，脂肪肝等。并且随着研究的深入，人们发现水通道蛋白与肿瘤的发生发展也具有密不可分的关系。

AQP1是最早被发现的水通道蛋白，AQP1基因位于人染色体7p14，分子大小为28KD。AQP1在细胞膜上主要以四聚体形式存在，每个单体是1条含269个氨基酸残基的肽链，每个单体均有独立的水转运功能。AQP1单体包含6个跨膜螺旋（Ⅰ-Ⅵ）和5个连接螺旋的环（A-E），其中A环，C环和E环定位于胞质外侧，B环和D环及肽链的N末端和C末端均位于胞质内侧。胞内侧的B环与胞外侧的E环分别含有高度保守的天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸（NPA）序列，各自折叠成短的α螺旋嵌入细胞膜内且相对形成180°，构成运水通道的核心部位，并与靠近四聚体中心的4个α螺旋构成完整通道，形成“沙漏模型”结构。AQP1能选择性地通过大量的水，而不允许其它离子或分子通过。

在泌尿系统中，AQP1分布于肾脏近曲小管的顶质膜和基底膜，主要参与近曲小管的液体重吸收过程。在神经系统中，AQP1在脉络上皮细胞表达，参与脑脊液的形成与流动，在脊髓背角浅层神经元中，AQP1参与神经信号的传导。在消化系统中，AQP1在肝细胞，胰细胞等细胞中均有表达，参与脂肪代谢，腺体分泌等过程。

近年来有研究表明，AQP1被发现在多种肿瘤细胞中高表达，包括胆管癌、膀胱癌、脑瘤、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、鼻咽癌、前列腺癌等，并参与到肿瘤发生发展的多个过程。AQP1在肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭过程中起重要作用，还可以调节肿瘤的血管生成。

由于水通道蛋白本身对于液体的分泌与吸收的作用，加上其在肿瘤进展过程中有着不可替代的作用，所以水通道蛋白成为肿瘤新的药物治疗靶点。

发明内容

本发明所提出的一种AQP1过表达质粒及其在影响乳腺癌细胞耐药性上的用途，目的在于提供一种新的乳腺癌细胞表阿霉素敏感性的影响因素，为下一步研制抗癌药物，尤其是乳腺癌，奠定理论基础。

本发明是按照以下技术方案实现的。

一种AQP1过表达质粒，在PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro质粒上整合3×flag核苷酸序列及AQP1核苷酸序列。

所述3×flag核苷酸序列前端设置有ATG起始密码子。

所述AQP1过表达质粒在乳腺癌细胞中过表达。

一种上述AQP1过表达质粒在影响乳腺癌细胞耐药性上的用途。

AQP1过表达质粒增强乳腺癌细胞对表阿霉素的敏感性。

本发明获得了如下有益效果：

本发明为研究AQP1影响肿瘤细胞化疗药物敏感性的作用机制奠定了基础，同时本发明提供了一种新的影响乳腺癌细胞表阿霉素敏感性的因素，也为下一步研制抗癌药物，尤其是乳腺癌，奠定理论基础，具有广阔的应用前景。

附图说明

图1是本发明PCDH-P-3×flag-AQP1重组质粒图谱；

图2是本发明western bloting检测PCDH-P-3×flag-AQP1重组质粒表达情况图；

图3是本发明PCDH-P-3×flag-AQP1慢病毒质粒对乳腺癌细胞表阿霉素敏感性的影响图。

具体实施方式

为了进一步阐释本发明的技术方案及其所实现的技术效果，下面将结合附图及实施例对本发明进行进一步的说明。

1.PCDH-P-3×flag-AQP1重组质粒的构建

原始质粒：PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro（购自SBI公司）