[发明专利]一种低锰利用基因、蛋白、重组表达载体及其制备与应用

权利要求书

1.一种低锰利用基因在提高植株对低锰的耐受能力中的应用，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述应用包括构建超表达植物株系，包括以下步骤：

步骤1、扩增核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的基因的开放阅读框；

步骤2、将步骤1中扩增的核苷酸片段构建于超表达载体；

步骤3、测序，获得测序结果正确的重组表达载体；

步骤4、将所述重组表达载体转化至根癌农杆菌；

步骤5、挑取所述根癌农杆菌的单克隆至培养液进行培养；

步骤6、将菌体离心，加入侵染试剂，侵染目标株系；

步骤7、筛选转基因阳性株系。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述步骤1中，用于扩增所述基因的引物如SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示。

3.根据权利要求1-2所述的应用，其特征在于，所述步骤2中，所述超表达载体为pEarleyGate 101。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤4中，所述根癌农杆菌为根癌农杆菌GV3101。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤5中，挑取所述单克隆于含卡纳霉素、庆大霉素和利福平抗性的LB培养液中，28℃震荡培养24-36h。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤6中，所述侵染试剂为5％蔗糖和1/2000Silwet。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述步骤6中，所述目标株系为拟南芥株系。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述步骤6中，所述目标株系为拟南芥野生型Col-0。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述步骤7中，用Basta抗性筛选所述转基因阳性株系。

10.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基因编码的氨基酸序列如SEQ IDNO：2所示。

11.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基因编码的蛋白在植株细胞内定位于内膜系统的反式高尔基体上。

12.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，在低锰环境下，所述基因编码的蛋白在所述植株体内参与锰由地下往地上部的装载及细胞内再利用的过程。