[发明专利]一种大黄鱼干扰素调节因子IRF3启动子、核酸构建体、细胞及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了一种大黄鱼干扰素调节因子IRF3启动子、核酸构建体、载体，细胞及其制备方法和用途。所述大黄鱼干扰素调节因子IRF3启动子的核苷酸序列如Seq ID No.1所示，或者为与Seq ID No.1互补的核苷酸序列。本发明还保护了所述的启动子或核酸构建体或载体或重组细胞或含有启动子或核酸构建体或载体或重组细胞的鱼类或哺乳动物在调控目的基因表达或转基因鱼中的用途。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种大黄鱼干扰素调节因子IRF3启动子、核酸构建体、细胞及其制备方法和用途。

背景技术

干扰素调节因子(Interferon regulatory factor,IRF)家族是一类重要的转录因子，具有多种生物学作用，包括对机体免疫应答、细胞凋亡等信号转导通路的调节等(Taniquchi T,Oqasawara K,Takaoka A,et al.,IRF family of transcription factorsas regulators of host defense[J].Annu Rev Immunol,2001；19:623–55)。IRF3属于干扰素调节因子家族成员，其蛋白分子二级结构由氨基端的DNA结合结构域(DNA bindingdomain,DBD)和羧基端的IRF相关结构域(IRF associated domain,IAD)构成(Lohoff M,Mak TW,Roles of interferon-regulatory factors in T-helper-celldifferentiation[J].Nat Rev Immunol,2005；5:125–35)。哺乳动物中的研究表明，当细胞受病毒侵袭时，细胞可通过模式识别受体如Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)中的TLR3、RIG样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)中的RIG-I/MDA5等识别病毒的RNA结构，并通过其介导的细胞信号通路，诱导IRF3发生磷酸化并活化，活化的IRF3分子可以自身形成同源二聚体复合物，或与IRF7形成异源二聚体复合物，并进入细胞核，结合到I型干扰素如IFN-β或者其他干扰素调节基因如ISG54(interferon stimulated gene 54)基因启动子区域，调节基因的表达，从而在受病毒感染的宿主细胞以及相邻细胞中诱导抗病毒状态的形成，在宿主的抗病毒免疫反应中发挥重要作用(Matsumiya T and Stafforini DM,Function and regulation of retinoic acid-inducible gene-I[J].Crit RevImmunol,2010；30:489–513)。鉴于干扰素调节因子IRF3功能的重要性，研究其基因的表达调控机制对于揭示宿主的抗病免疫反应及细胞信号转导通路具有重要意义。哺乳动物中的研究中，已有通过构建干扰素调节因子IRF3启动子的荧光素酶报告系统，研究目标基因的功能及其介导的细胞信号转导通路的相关报道(Sabbah A,Chang TH,Harnack R,et al.,Activation of innate immune antiviral responses by Nod2[J].Nat Immunol,2009；10:1073–80)。

目前，干扰素调节因子IRF3基因已从多种硬骨鱼类中得到克隆，如斑马鱼(Daniorerio)、大黄鱼(Larimichthys crocea)、鲫鱼(Carassius auratus)、鲤鱼(Cyprinuscarpio)、草鱼(Ctenopharyngodon idella)、大西洋鲑(Salmo salar)、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)、罗非鱼(Oreochromis niloticus)、石斑鱼(Epinephelus coioides)、欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)等。一些鱼类干扰素调节因子IRF3基因在不同组织中的表达水平以及在病原或病原相关类似物刺激下的表达调控已较明确，然而，目前对鱼类干扰素调节因子IRF3基因的表达调控机制，尤其是有关干扰素调节因子IRF3所涉及的细胞信号转导通路调控网络的相关研究依然较匮乏。

发明内容