[发明专利]一种制备高特异性褐藻寡糖的酶

说明书

本发明的目的是提供一种制备高特异性褐藻寡糖的酶，所述酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明酶用于降解褐藻胶来制备褐藻寡糖。本发明所筛选获得的蛋白酶在酶解褐藻胶时获得特异性的产物，从而使反应的副产物更少，有利于后续更方便的通过胶柱层析来分离单一寡糖，从而有效的提高了制备褐藻寡糖的效率，节省了成本。

技术领域

本发明提供一种制备高特异性褐藻寡糖的酶，属于功能酶筛选制备技术领域

背景技术

褐藻胶是源自于褐藻植物的细胞壁的水溶性酸性多糖，其主要由α-L-古罗糖醛酸和β-D-甘露糖醛酸组成。在目前的研究中，褐藻胶主要用来降解制备褐藻寡糖。

海藻寡糖分子量低，水溶性强，稳定性高，实验和临床已经发现海藻寡糖具有免疫调节、降血压、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抗凝血及抗病毒等多种生理活性，还可以作为糖尿病、肥胖症、直肠结肠癌、习惯性便秘患者的疗效食品。在药物研制、功能食品开发、绿色农业等领域具有广阔的开发应用前景。并且，褐藻寡糖具有抗氧化、免疫调节等多种不同的生物学活性，且寡糖存在分子量小，容易被吸收利用的优势，因此在药物制剂、功能食品、化工等多个领域具有广阔的应用前景，是一种最新一代的功能性低聚糖。

目前通过褐藻胶来制备褐藻寡糖有多种方法，例如酸法降解、超声降解、氧化降解、酶降解法等。其中酶法降解相较于化学法制备反应温和、易于控制，耗能低，产物回收率较高以及不会产生严重的污染等优点。但是，现在使用褐藻胶酶降解褐藻胶制备的寡糖为二糖至五糖的混合物(P2-P5)，还需要通过凝胶柱层析分离才能获得单一的寡糖组分(欧昌荣等，微生物发酵-膜分离法制备褐藻胶寡糖及其产物分析，微生物学报，45卷第2期，2005年4月)。但上述的分离方法避免不了会增加成本。因此，如何在酶解过程中控制酶解产物的均一性一直是褐藻胶寡糖制备领域的研究热点。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备高特异性褐藻寡糖的酶，在降解褐藻寡糖的时候使制备寡糖主要为二糖和三糖，从而弥补现有技术的不足。

本发明所提供的酶，包含有：

1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的酶；

2)将SEQ ID NO:1所示氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，具有1)的酶活性的，由1)衍生的酶；

编码上述酶的基因，其一种编码核苷酸序列为SEQ ID NO:2；

本发明还提供一种重组载体，该重组载体中插入了用于编码上述酶的核苷酸片段，用于重组表达上述的蛋白酶；

本发明再一个方面还提供一种重组宿主，该重组宿主转化/转染有上述的重组载体。

本发明还提供一种制备上述酶的方法，是通过上述的重组宿主来发酵表达制备的。

本发明酶用于降解褐藻胶来制备褐藻寡糖。

本发明所筛选获得的蛋白酶在酶解褐藻胶时获得特异性的产物，从而使反应的副产物更少，有利于后续更方便的通过胶柱层析来分离单一寡糖，从而有效的提高了制备褐藻寡糖的效率，节省了成本。

附图说明

图1：本发明酶与NCBI编号为WP_017069952.1的海藻酸裂解酶的BLSTP结果图；其中Query为本发明的酶，Subject为WP_017069952.1的海藻酸裂解酶；

图2：本发明酶的基因扩增图；

图3：本发明筛选的酶对褐藻胶的降解产物的层析电泳图，其中1为NCBI编号为WP_017069952.1的酶的产物；2为本发明筛选酶的降解产物。

具体实施方式