[发明专利]源于草酸青霉黑麦酮酸H制备抗人口腔表皮样癌药物应用

说明书

本发明涉及源于草酸青霉黑麦酮酸H制备抗人口腔表皮样癌药物应用。该化合物具有抑制口腔表皮样癌细胞增殖作用。其结构式为：。通过发酵培养草酸青霉(Penicillium oxalicum)IBPT‑6，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。经实验证实，该化合物对人口腔表皮样癌细胞KB具有较好的抗肿瘤活性。可作为制备人口腔表皮样癌细胞增殖抑制药物或抗肿瘤药物用于人口腔表皮样癌的研究。

技术领域

本发明涉及源于草酸青霉的黑麦酮酸H在制备抗人口腔表皮样癌药物的应用，属于医药领域。

背景技术

黑麦酮酸类化合物（Secalonic acids）属于麦角色素类（Ergochrome）次生代谢产物，为氧杂蒽酮二聚物。自从 Stoll 等在 1952 年从真菌中分离得到黑麦酮酸 A（Secalonic acid A）之后，该系列的化合物黑麦酮酸（A, B, C, D, E, F, G）就不断地被发现及研究。黑麦酮酸类化合物具有各种不同的生理活性，以黑麦酮酸D（Secalonic acidD, SAD）为例，5 mg/ml的 SAD加入到生理盐水中, 在5-20 mg范围内，即可以治疗早期膀胱癌，50-100 mg范围内，对更严重的膀胱癌有疗效并且没有副作用发生。经研究发现，一些海洋真菌能够在次级代谢过程中产生结构新颖、活性好的黑麦酮酸类化合物，具有很好的药用和产业化前景。

本发明人研究得知，草酸青霉 (Penicillium oxalicum) IBPT-6， (已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址: 武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC NO：M 2013714) 的发酵产物的粗提取物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示黑麦酮酸类化合物具有抗人口腔表皮样癌活性，目前尚未见该化合物对人口腔表皮样癌细胞的增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种源于草酸青霉的黑麦酮酸类化合物Secalonic acidH制备方法及其抑制人口腔表皮样癌细胞增殖方面的应用。该化合物具有抑制人口腔表皮样癌细胞增殖作用，具有抗人口腔表皮样癌活性。其结构式为：

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该化合物的制备方法，是通过发酵培养草酸青霉 (Penicillium oxalicum)IBPT-6，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。具体步骤如下：

1发酵生产

培养微生物的常规方法，取草酸青霉 (Penicillium oxalicum) IBPT-6接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养2至3天，然后接种到培养液中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液；所述培养液组成：每升水含甘露醇20.0 g、酵母膏3.0 g、麦芽糖20.0 g、味精10.0 g、葡萄糖10.0 g、KH₂PO₄ 0.5 g、MgSO₄·7H₂O 0.3 g、NaCl 15.0 g；

2 浸膏的获得

用纱布将菌丝体和发酵液分离。菌丝体用丙酮溶液（含20%~30%水）连续超声破壁3次，过滤去除残渣，得到菌丝体的含丙酮和水的粗提物。减压浓缩去除丙酮，得到粗体物的水溶液，再以体积比1:2加入乙酸乙酯萃取3次，得乙酸乙酯粗提液，减压浓缩至近干得菌丝体浸膏36.5 g。

3 化合物的分离精制