[发明专利]一种茶树组培快繁体系的建立方法

权利要求书

1.一种茶树组培快繁体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

外植体选择，3-5月期间采自温室带有饱满腋芽的当年生半木质嫩枝；

初代培养：‘ 陕茶1号’ 的初代培养最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+GA₃3.0mg/L+PVP 4.0mg/L；‘安吉黄茶’最佳培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+IBA 0.1mg/L+GA₃3.0mg/L+PVP 4.0mg/L；

继代培养：‘ 陕茶1号’ 继代培养的最佳培养基为MS+IBA 0.1mg/L+6-BA 3.0mg/L+GA₃1.0mg/L；‘安吉黄茶’：MS+TDZ 0.02mg/L+IBA 0.1mg/L；继代4～5次的组培苗转到壮苗培养基中培养；

壮苗培养：‘陕茶1号’继代苗转至MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 1.0mg/L+GA₃ 1.0mg/L；‘安吉黄茶’转至MS+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.01mg/L的壮苗培养基培养20天有助于茶苗的叶片展开与伸长；

生根培养：‘陕茶1号’生根方法为1000mg/L IBA浸泡，茶苗基部1min后接种至不添加任何植物激素的1/2MS空白培养基中；‘安吉黄茶’生根培养基为1/2MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.2mg/L+IBA 0.1mg/L。

2.如权利要求1所述的茶树组培快繁体系的建立方法，其特征在于，用洗洁精清洗表面，用自来水冲洗5小时；在无菌室内用75％酒精浸没20-40秒；用35％的次氯酸钠溶液浸泡10-15分钟；用无菌水冲洗4-5次，放入已灭菌的培养皿中的滤纸上待用。

3.如权利要求1所述的茶树组培快繁体系的建立方法，其特征在于，无菌室内消毒具体包括：

用紫外灯照射30-45分钟；

地面用低浓度的来苏尔溶液消毒；

超净工作台消毒，开启无菌风开关；

用75％的酒精棉球擦净工作台，接种时先点燃酒精灯，镊子和剪刀先浸泡在75％的酒精溶液中。

4.如权利要求1所述的茶树组培快繁体系的建立方法，其特征在于，培养中的植物生长调节剂包括：称取6-BA，溶于HCl中，用蒸馏水容，使最终浓度为0.5mg/L；TDZ和NAA分别溶于NaOH中，用蒸馏水定容，使最终浓度分别0.01mg/L和0.1mg/L；IBA、GA₃溶于酒精中，蒸馏水定容，使终浓度分别为0.1mg/L、1mg/L；配制好的植物生长调节剂存于植物棕色瓶中，4℃冰箱保存。

5.如权利要求1所述的茶树组培快繁体系的建立方法，其特征在于，植物组织培养的培养基配制、分装与灭菌包括：

(1)量取所配培养基总体积的2/3体积的蒸馏水，加入4.43gMS干粉，30g蔗糖，7～8g琼脂，4gPVP，依次加入植物激素；

(2)调节培养基的pH值，用pH计或pH试纸测定；

培养基的pH按照培养材料分别用1mol/LNaOH溶液、1mol/L HCl溶液来调节所配制培养基的pH值；

(3)灭菌；加热至沸腾，将配制并加热好的培养基分别装在事先洗净的三角瓶，用封口膜封口，注明标签；然后和用牛皮纸或报纸包好的培养皿及用三角瓶装好的蒸馏水一道进行高压灭菌；，采用全自动高压灭菌锅，待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖，在98kPa、121.3℃下，灭菌21min；

(4)分装；灭菌后取出培养基，在超净工作台中向培养基中依次加入经细菌过滤器过滤后的植物激素，混匀后分装备用。