[发明专利]一种编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因及其应用

权利要求书

1.一种编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因，其特征在于，序列如SEQ ID NO. 1所示。

2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，还含有BamH I和Xho I限制性内切酶酶切位点。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，所述编码猪圆环病毒2型Cap蛋白的基因序列如SEQ ID NO. 2所示。

4.一种含有如权利要求2或3所述基因的重组表达载体，其特征在于，该重组表达载体是将所述基因插入原核表达载体pET30a的BamH I和Xho I酶切位点之间所得。

5.一种含有如权利要求4所述重组表达载体的重组菌，其特征在于，所述重组菌是将所述重组表达载体转化大肠杆菌BL21所得。

6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于，表达猪圆环病毒2型Cap蛋白为诱导型表达；所述猪圆环病毒2型Cap蛋白序列如SEQ ID NO. 3所示。

7.一种如权利要求5所述的重组菌在制备猪圆环病毒2型疫苗中的应用。

8.一种如权利要求5所述的重组菌在制备猪圆环病毒2型疫苗的方法，其特征在于，采用如下步骤：

（1）将重组菌诱导表达，再将菌体破碎裂解收集的上清液，加入甲醛灭活，制成灭活蛋白液，灭活检测合格的蛋白液即为疫苗抗原；

（2）将上述疫苗抗原与佐剂混合搅拌，即得猪圆环病毒2型疫苗。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述上清液抗原效价不低于1:8，PCV2 Cap蛋白含量不低于150μg/mL；所述甲醛的浓度为0.2%w.t；所述灭活时间为24小时；所述疫苗抗原与佐剂的体积比为85:15；所述疫苗为水包油型。

10.根据权利要求8或9任一所述的方法，其特征在于，所述佐剂选自ISA系列佐剂。

11.一种猪圆环病毒2型Cap蛋白的制备方法，其特征在于，采用如下步骤：诱导培养重组菌，收集菌体，破碎后，获得裂解液上清，纯化后获得猪圆环病毒2型Cap蛋白；

所述猪圆环病毒2型Cap蛋白的编码基因，序列如SEQ ID NO. 1所示。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述培养基为含卡纳霉素的液体LB培养基；所述重组菌的接种量为1-5%；所述诱导培养的诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，浓度为0.2-1.2 mmol/L，诱导时间为1-8h，诱导起始量为菌液OD₆₀₀值为0.6-1.0。

13.根据权利要求11或12任一所述的制备方法，其特征在于，重组菌的接种量为2-3%，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的浓度为0.4-0.8 mmol/L，诱导时间为2-5h。