[发明专利]用于细菌的多顺反子表达系统

权利要求书

1.包含多顺反子表达单元的重组核酸，所述多顺反子表达单元以5’至3’顺序包含：

（a）对乳酸菌而言内源的启动子，其中所述启动子是eno启动子（Peno）、usp45启动子（Pusp45）、gapB启动子（PgapB）、pyk启动子（Ppyk）、rpmB启动子（PrpmB）或rplS启动子（PrplS）；

（b）对所述乳酸菌而言内源的基因，即内源基因，其中所述启动子是所述内源基因的天然启动子；以及

（c）位于所述内源基因3’末端的一个或更多个对所述乳酸菌而言外源的基因，即外源基因；

其中所述内源基因与所述一个或更多个外源基因通过对所述乳酸菌而言内源的至少一个基因间区域转录偶联，并且所述至少一种基因间区域包含（i）rplW、rplP、rpmD、rplB、rpsG、rpsE、rplN、rplM、rplE或rplF的起始密码子与（ii）其5’毗连基因的终止密码子之间的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的重组核酸，其中所述基因间区域是rpmD之前的基因间区域。

3.根据权利要求1或2所述的重组核酸，其中所述基因间区域包含SEQ ID NO:3的序列。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的重组核酸，其中所述乳酸菌是乳球菌（Lactococcus）、乳杆菌（Lactobacillus）或肠球菌（Enterococcus）。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组核酸，其中所述乳酸菌是乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的重组核酸，其中所述一个或更多个外源基因编码一个或更多个多肽。

7.根据权利要求6所述的重组核酸，其中所述一个或更多个外源基因与编码分泌信号的核酸序列翻译偶联。

8.根据权利要求7所述的重组核酸，其中所述分泌信号是乳球菌Usp45分泌信号。

9.根据权利要求6至8中任一项所述的重组核酸，其中所述一个或更多个多肽在对象中具有治疗性或预防性作用。

10.根据权利要求6至9中任一项所述的重组核酸，其中所述一个或更多个多肽是：

（a）白细胞介素10（IL-10）；

（b）三叶因子1（TFF1）；

（c）胰岛素原（ins）；或

（d）白细胞介素27（IL-27）。