[发明专利]一种天然活性多肽SPNP‑27的制备方法

权利要求书

1.一种从广西缨毛蛛粗毒中制备新型生物活性多肽的方法，所述的生物活性多肽为蜘蛛抑钠肽-27（SPNP-27），其氨基酸序列为：

NH₂- Asp Cys Leu Gly Leu Phe Trp Ile Cys Gln Tyr Met Asp Asp Lys Cys Cys Pro Gly Tyr Lys Cys Glu Arg Ser Ser Pro Trp Cys Lys Ile Asp Ile Trp-NH₂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：（1）粗毒干粉用双蒸水溶解配成5mg/ml的毒素溶液，12 000rpm离心5 min, 上清用Millipore公司一次性过滤器(0.22 µm)过滤后，置于4°C保存；粗毒上样阳离子交换HPLC(ion-exchange HPLC)进行第一步分离；采用Waters 650型HPLC、美国Pharmacia 公司的Hiprep^TM16/10 CM FF预装柱进行分离；486检测器检测，检测波长为 215nm；流动相为四相洗脱系统，流速为1.5mL/min；洗脱液分别为A相0.1M NaH₂PO₄, B相0.1M Na₂HPO₄, C相 1M NaCl, D相ddH₂O；上述经ion-exchange HPLC分离后收集的各洗脱峰分别上样反相HPLC进行进一步纯化；采用分析型Vydac C18 RP-HPLC反相柱 (218TP54, 4.6×250 mm) 于分析型Waters 2690 高效液相色谱仪上进行梯度洗脱，996检测器检测，检测波长为215nm，流动相为含0.1%TFA的水（A）和乙腈（B），洗脱速度为1mL/min，柱温为40℃；

（2）通过上述阳离子交换HPLC以及两步反相HPLC共三步分离获得的SPNP-27，运用质谱鉴定纯度达到98%以上，其分子量约为4086.4 Da，经序列测定，该多肽的一级结构由34个氨基酸残基组成，其中含6个半胱氨酸并形成三对二硫键，C-端酰胺化；多肽SPNP-27纯化冻干粉的理化性状为白色或类白色疏松体，无气味，极易溶解于水，水溶液近于无色透明。