[发明专利]肝衰竭的血清糖蛋白N‑糖组图谱模型的建立方法

权利要求书

1.肝衰竭的血清糖蛋白N-糖组图谱模型的建立方法，具体步骤如下：

步骤1，收集肝衰竭患者和正常对照人员的血清；

步骤2，配制含有5％SDS的浓度为10mM、pH为8.3的NH₄HCO₃溶液为试剂A，试剂B由2.2U/μL的PNGaseF与3.33％的NP-40按体积比为1：20混合配制，试剂C由20mM APTS和1M NaCNBH₃等体积混合配制，试剂D由100mM NH₄AC、2mU/μL的唾液酸酶和双氧水按体积比为5：1：14混合；

步骤3，寡糖链的制备：往稀释一倍的血清中加入一半体积的试剂A，95℃反应5min变性，然后加入与血清体积相同的试剂B，37℃反应3h后干燥；

步骤4，寡糖链的标记：在步骤3的液体中加入与试剂A体积相同的试剂C，65℃反应3h进行荧光标记，然后加入水终止标记反应；

步骤5，去唾液酸处理：取等体积的步骤4荧光标记后的液体与试剂D在45℃反应3h，然后加入水终止反应；

步骤6，寡糖链分离分析：取步骤5唾液酸处理后的液体，用DNA测序仪进行片段分析，得到N-糖组图谱；

步骤7，将得到的N-糖组图谱进行峰值量化，用每个峰的峰高值除以所有峰的高度的总和，定量计算得到每个峰的相对含量，然后对量化后的肝衰竭组和正常对照组N-糖组图谱中的NA2的峰值进行比对统计分析。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1中，所述的血清经过灭活处理。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4中，血清样品的荧光标记时间为2.5h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5中，去除末端唾液酸的反应时间为4h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤7中，NA2的相对含量的cut-off值为35.6。