[发明专利]用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及保健品制备技术领域，具体是一种用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法。

背景技术

多肽从二十世纪初才开始受到关注，研究发现它区别于蛋白质区别于氨基酸，具有药物的作用。到了上个世纪九十年代才有了长足发展，在不断更新的技术指导下，多肽的应用范围越来越广，作用也越来越大，这才迈进了我们的生活，在我们生活中占据的份额越来越大，多肽类药物高效低毒特异性强具有区别于其他药物的特有优势，正不断影响着我们的生活。而且多肽潜力巨大，是生物科学发展的又一大突破和发展方向。

天然存在的海洋活性多肽由于在生物体中含量低，而且提取困难，难以实现大量生产供给所需，化学人工合成多肽成本昂贵。所以，人们更多地把目光投向开发蛋白酶解产物获得活性多肽这条途径上来。由于海洋生物生存的环境与陆地生物完全不同，如高压、低温、高温和高盐等极端环境，为了适应这些极端的海洋生物环境，海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，同时，海洋生物蛋白资源无论在种类和数量上都远远大于陆地蛋白资源，并且未得到很好的开发。种类繁多的海洋蛋白氨基酸序列中，潜在着许多具有生物活性的氨基酸序列，用特异的蛋白酶水解，就释放出有活性的肽段。海洋生物蛋白资源是21世纪人类重要的蛋白类食物及生物活性物质的重要来源。我国目前的海洋生物蛋白资源总量在世界各国名列前茅，但我国目前的蛋白类水产品中，除一部分直接食用外，大部分通过简单的加工技术制成食品进入市场，加工技术落后，产品结构单一，产品的附加值低，使得产品在国际市场上的竞争力较差。因此，我国急需对海洋生物蛋白资源进行优化利用和高值化加工。

现有技术如授权公告号为CN103333940B的中国发明专利，公开了一种利用带鱼制备二肽基肽酶IV抑制肽的方法，步骤包括：将带鱼加水绞碎成均匀的鱼肉浆；鱼肉浆放入酶解罐中，添加内切蛋白酶，搅拌水解4～12h，得水解液；升温至95～100℃，保持10～15分钟灭酶；将水解液冷至40～60℃，添加外切蛋白酶，搅拌水解2～8h；升温至95～100℃，保持10～15分钟灭酶；内切蛋白酶为木瓜蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、Alcalase碱性蛋白酶中的一种。外切蛋白酶为Flavourzyme风味蛋白酶。将上述所得灭酶后的水解液离心取上清液；将上清液加入到超滤膜分离器中，调节超滤膜的压力为0.05～0.1MPa，超滤膜的截留分子量为3000Da，收集超滤膜透过液；采用亲和层析方法分离纯化DPP-IV抑制肽。海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，上述方法采用陆地上提取的蛋白酶对海洋生物进行酶解，酶解效率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种使用从海洋生物中提取的蛋白酶酶解的用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法，制备得到的带鱼活性提取物能有效消除关节肿痛，促进关节滑液的生成，加速软组织的重建和恢复。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：用于骨关节修复的带鱼活性提取物的制备方法，包括复合酶酶解、多级膜过滤、纳滤、HPLC洗脱和冷冻干燥，上述复合酶酶解步骤为采用海洋芽孢杆菌产碱性蛋白酶和条斑紫菜蛋白酶酶解带鱼鱼肉匀浆液，并采用超声波辅助酶解。海洋生物蛋白质无论氨基酸的组成还是氨基酸的序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，海洋芽孢杆菌产碱性蛋白酶和条斑紫菜蛋白酶同时对带鱼蛋白进行酶解，可得到大量有活性的肽段。

作为优选，冷冻干燥步骤为：预冻：-35~-45℃预冻3~5h；冷冻干燥：-45~-35℃，3~5Pa冷冻干燥5~7h，-10~-5℃，10~20Pa冷冻干燥2~3h；升华干燥：10~15℃，50~60Pa升华干燥3~4h；解析干燥:7~14℃，3~5Pa解析干燥2~4h，得到用于骨关节修复的带鱼活性提取物。冻干整个过程都在程序的控制下，操作简单，工序简洁，自动化程度高，减少了人力、物力。低温下干燥能更好地保留活性肽的活性；低压下干燥，活性肽不易氧化，疗效更好；冻结时活性肽形成“骨架”，干燥后保存原形，为多孔疏松结构且颜色基本不变，产品外观更加优良；复水性好，冻干活性肽能迅速吸水还原成冻干前状态，使用方便；脱水彻底，活性肽中含水量低，一般在1%-3%，且有利于长途运输和长期保存。

作为优选，冷冻干燥前加入30~40wt%辅料，辅料的成分及其重量份为：80~90份右旋糖酐-40和2~5份活性肽。上述辅料利于产品成型，即防止在抽真空时药物与水蒸气一起飞散或成形时收缩，并且可保护活性肽。