[发明专利]一种细胞因子ELISA标准品的制备方法

说明书

本发明公开一种细胞因子ELISA标准品的制备方法。所述制备方法包括如下步骤:S1.对冷冻干燥的相关设备进行预冷，预冷至4℃；S2.将细胞因子标准蛋白用水溶解后，用冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至已预冷西林瓶中，轻盖上盖子；S4.将S3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到细胞因子标准品；S2.中，所述冻干液由以下按质量百分数计算的组分组成：0.5～5％干酪素钠，1～10％甘露醇，0.05～0.5％聚吡咯烷酮K30，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。本发明的制备方法可以制备出保质期长达两年的细胞因子标准品。采用本发明的冻干液配方进行冻干，能获得很好的成型效果，并且产品外观良好，不出现挂壁等不良现象。

技术领域

本发明属于生物体外诊断试剂制备领域。具体涉及一种细胞因子ELISA标准品的制备方法。

背景技术

酶联免疫吸附(ELISA)作为国际公认的蛋白定量金标准，具有灵敏度高，特异性好等特点。其中标准品是ELISA试剂盒构成的一个关键，标准品的保质期直接影响到试剂盒的货架期。目前ELISA标准品的保存方法有甘油-20℃保存法和真空冷冻干燥法，此两种方法对蛋白的稳定性有一定的延长作用，但难以满足试剂盒长时间的保存需求。从实际的经验发现，不同蛋白对于同一配方的冻干液表现出来的保存效果不同。而市面上一般的试剂盒的保存时间为半年，令使用受到限制。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种细胞因子ELISA标准品的制备方法。该方法尤其对猴细胞因子ELISA标准品的制备有优势，其制备的猴细胞因子ELISA标准品具有较长的保质期。

本发明的上述目的通过如下方案予以实现：

一种细胞因子ELISA标准品的制备方法，包括如下步骤:

S1.对冷冻干燥的相关设备进行预冷，预冷至4℃；

S2.将细胞因子标准蛋白用水溶解后，用冻干液稀释至目标浓度，得到标准浓度蛋白溶液；

S3.将S2.得到的标准浓度蛋白溶液分装至已预冷西林瓶中，轻盖上盖子；

S4.将S3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空冻干机中至完全干燥，得到细胞因子ELISA标准品；

S2.中，所述冻干液由以下按质量百分数计算的组分组成：

0.5～5％干酪素钠，1～10％甘露醇，0.05～0.5％聚吡咯烷酮K30，余量为浓度0.01mol/L的磷酸缓冲液。

在标准品的冻干粉剂中，现存通常有两种产品，一种是散的粉剂，一种是结合得相对紧密的粉剂，即冻干粉之间能形成一个良好的型状，通常是饼型。而前者比较容易获得，但在开盖时容易使冻干粉飘出，后者则需要在赋型剂等作用下经过配方的优化获得，并且可能出现塌陷等成型问题。

采用本发明的制备方法进行冻干，能使冻干粉获得很好的成型效果，并且产品外观良好，不出现挂壁等不良现象。主要原因是利用了甘露醇、聚吡咯烷酮K30二者协同作用有助于蛋白的成膜，减少冻干粉在冻干后出现的挂壁现象，并且通过适量的K30显著提高冻干粉的成型率。

磷酸缓冲液的pH值可以参考现有技术。最优选地，所述磷酸缓冲液的pH值为7.4。

最优选地，所述干酪素钠的质量分数最优选为1％。

最优选地，所述甘露醇的质量分数最优选为5％。

现有技术中，为了确保冻干效果良好，通常不会在冻干瓶(西林瓶)中添加过多的蛋白溶液，因为如果溶液体积过多，液面高度过大，会使冻干变得困难，冻干效果变差。优选地，S3.中，所述每瓶容积为3mL的西林瓶，加入1mL的所述标准浓度蛋白溶液。