[发明专利]胃蛋白酶原和抗幽门螺杆菌抗体检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种试剂盒，其特征在于，包括：

第一包被膜；和

第二包被膜，所述第一包被膜的一端与所述第二包被膜的一端相连；

所述第一包被膜中的至少一块区域包被有荧光微球标记的胃蛋白酶原Ⅰ抗体、荧光微球标记的胃蛋白酶原Ⅱ抗体和荧光微球标记的第一幽门螺杆菌抗原，

所述第二包被膜包含分离的第一区域、第二区域、第三区域和第四区域，所述第一区域、所述第二区域和第三区域比所述第四区域靠近所述第一包被膜，

所述第一区域包被有抗胃蛋白酶原Ⅰ抗体，

所述第二区域包被有抗胃蛋白酶原Ⅱ抗体，

所述第三区域包被有第二幽门螺杆菌抗原，

所述第四区域包被有抗抗体，所述抗抗体特异性结合所述胃蛋白酶原Ⅰ抗体、所述胃蛋白酶原Ⅱ抗体和所述第一幽门螺杆菌抗原，

形成所述荧光微球的材料包括：聚苯乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述材料进一步包括下列至少之一：

量子点；以及

稀土络合物，

优选地，所述量子点为CdSe/ZnS，

所述稀土络合物为Eu(TTA)₃Phen。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光微球具有功能化表面。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光微球是通过下列方式获得的：

将苯乙烯和甲基丙烯酸甲脂按照1:1的质量比进行混合，再向所得到的混合物中加入1体积％稀土络合物Eu(TTA)₃Phen或者0.5体积％CdSe/ZnS量子点，超声混匀，得到a液；

将0.05体积％羧基化聚乙烯醇和0.05体积％碳酸氢钠溶于水，得到b液；

将所述a液加入所述b液中，超声15分钟后，向所得到的混合液中通入氮气30分钟，同时进行搅拌，再加热到80℃，并向所述混合液中加入0.01～0.1体积％过硫酸钾，反应12小时，以便得到所述荧光微球。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光微球的粒径为50～500nm，优选100～250nm。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第二包被膜的另一端连接有吸水垫，

任选地，所述第一包被膜、所述第二包被膜和所述吸水垫固定在同一固相基质上，

任选地，所述第一包被膜为玻璃纤维素膜，所述第二包被膜为硝酸纤维素膜。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述胃蛋白酶原Ⅰ抗体、胃蛋白酶原Ⅱ抗体和第一幽门螺杆菌抗原分别与所述荧光微球通过肽键共价结合。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗抗体为羊抗鼠IgG抗体。

9.权利要求1～8任一项所述试剂盒在检测胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ和抗幽门螺杆菌抗体中的用途。

10.一种利用权利要求1～8任一项所述试剂盒检测胃蛋白酶原Ⅰ、胃蛋白酶原Ⅱ和抗幽门螺杆菌抗体的方法，其特征在于，包括：

将待测样本加到所述包被有荧光微球标记的胃蛋白酶原Ⅰ抗体、荧光微球标记的胃蛋白酶原Ⅱ抗体和荧光微球标记的第一幽门螺杆菌抗原的区域；

检测所述第一区域、第二区域、第三区域和第四区域的荧光强度，获得第一区域荧光强度、第二区域荧光强度、第三区域荧光强度和第四区域荧光强度；

基于第一比值及其对应的比值-浓度标准曲线，确定所述待测样本中的胃蛋白酶原Ⅰ浓度，

基于第二比值及其对应的比值-浓度标准曲线，确定所述待测样本中的胃蛋白酶原Ⅱ浓度，

基于第三比值及其对应的比值-浓度标准曲线，确定所述待测样本中的抗幽门螺杆菌抗体浓度，

其中，

所述第一比值＝第一区域荧光强度/第四区域荧光强度，

所述第二比值＝第二区域荧光强度/第四区域荧光强度，

所述第三比值＝第三区域荧光强度/第四区域荧光强度。