[发明专利]一种桔橙指孢囊菌及其在调控微生物代谢物非达霉素中的应用

说明书

本发明公开了一种桔橙指孢囊菌(Dactylosporangium aurantiacum)FID1307及其应用，该菌种由中国典型培养物保藏中心保藏，保藏号为CCTCC NO：M2017311，保藏日期为：2017年06月07日。本发明还公开了一种由此菌株发酵制备非达霉素的方法。本发明提供的发酵工艺经大生产实践，证明其发酵稳定、副产物少，大大地降低了后提取的难度，适宜工业化大生产，且获得的非达霉素产品质量高。

技术领域

本发明涉及一种微生物及其在制药领域中应用，具体地说是桔橙指孢囊菌通过调控微生物代谢获得非达霉素的应用。

背景技术

非达霉素(fidaxomicin，商品名Dificid，曾用名OPT-80，PAR-101)，是具有18元环结构的大环内酯类抗生素，可由桔橙指孢囊菌hamdenensis亚种(Dactylosporangiumaurantiacumsubspecie hamdenensis)发酵而得，具体可由放线菌指孢囊菌NRRL 18085产生。桔橙指孢囊菌发酵得到的产物是一族与非达霉素结构非常相近的产物，称为台勾霉素(tiacumicins)，按结构不同，分别称为台勾霉素A、B、C、D、E和F。非达霉素为R构型的台勾霉素B，具有新型的作用机制(结构式如下所示)。

非达霉素于2011年5月获美国FDA批准上市，用于治疗艰难梭菌(难辨梭状芽孢杆菌，Clostridium difficile)感染相关性腹泻(CDAD)。这是FDA近30年来批准的首个治疗CDAD的药物，欧盟2011年12月批准上市。

中国专利文献03818016.2(发明名称：台勾霉素的制备)公开了制备台勾霉素B的方法，所制备得到发酵产物中，含有较高的副产物、杂质(见附图1)。

中国专利文献201310208223.2(发明名称：一种游动放线菌菌株及其在制备非达霉素中的应用)公开了其制备得到发酵产物的HPLC分析图(见附图2)，图中显示发酵产物中含有较多的副产物和杂质。

本领域普通技术人员均知道现有技术制备得的非达霉素发酵产物中含有较多的杂物、副产物，这些物质的存在将对后续的提纯带来很大的难度，对于一些在提纯环节中很难去除的杂质，将严重影响最终药品的质量。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种发酵稳定、副产物少的非达霉素产生菌，同时提供该菌株在制备非达霉素中的应用，以及具体的发酵制备方法。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

一种桔橙指孢囊菌，分类命名为Dactylosporangium aurantiacum FID1307，由中国典型培养物保藏中心保藏(简称CCTCC)，保藏号为：CCTCC NO：M 2017311，保藏日期为：2017年6月7日。

所述的保藏号为CCTCC NO：M 2017311的菌株的菌落特征：菌落近圆形，表面平整，菌落直径1～2mm，中间隆起，无分泌物和可溶性色素产生。

所述的保藏号为CCTCC NO：M 2017311菌株可应用于发酵制备非达霉素。该制备方法包括下列步骤：

a.菌株采用保藏编号为CCTCC NO：M 2017311的菌株；

b.将按常规方法制备的30％甘油菌丝冷冻管，按摇瓶种子培养基体积的3～5％的接种量接入摇瓶种子培养基，220～260rpm，培养2～3天，得摇瓶种子液；

将摇瓶种子液按种子罐培养基体积0.1～0.2％的接种量接种于种子罐，120～200rpm，培养3～4天，得罐种子液；

将罐种子液按发酵罐培养基体积5～15％的接种量接种于发酵罐培养基，150～200rpm，发酵培养9～12天，收集发酵液中的树脂；