[发明专利]一种苹果多酚氧化酶活性促进剂及其应用

说明书

本发明涉及酶活性技术领域，特别涉及一种苹果多酚氧化酶活性促进剂及其应用。本发明的苹果多酚氧化酶活性促进剂，包括十二烷基三甲基溴化铵或十六烷基三甲基溴化铵与Gemini表面活性剂以重量比为10～2000:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性剂为二溴化‑双(二甲基十二烷基)戊二铵或二溴化‑双(二甲基十六烷基)戊二铵。本发明还包括应用上述促进剂提高苹果多酚氧化酶活性的应用，能够将苹果多酚氧化酶的活性提高至240％，且促进剂的用量水平低。

技术领域

本发明属于酶活性技术领域，具体涉及一种苹果多酚氧化酶活性促进剂及其应用。

背景技术

多酚氧化酶是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶，普遍存在于植物中，能够将酚或多酚氧化成对应的醌。其在食品、医药及环保行业有着广泛应用，研究其活性可以更好地解决食物储存、植物抵抗病原体及病毒侵害、含酚类有机物工业废水的生物降解等问题。

目前，研究人员多数研究提纯后的多酚氧化酶(PPO)，包括探究酶的最佳活性条件，表面活性剂(十二烷基硫酸钠(SDS))对酶活性的激发等，以达到最大可能提高酶活性的目的。PPO大量存在于植物中，其中苹果中含量丰富，我国苹果种植面积和产量均占世界总量的40％以上，但从苹果中提取的PPO活性较低。

专利CN 105734025 A利用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)提高苹果中PPO粗酶的活性。十六烷基三甲基溴化铵和十二烷基三甲基溴化铵是由一个亲水基和一个疏水基通过化学键连接构成的单链表面活性剂，属于传统的表面活性剂。当CTAB浓度为0.3-1.0mM时，粗酶活性可提高最大为75％左右。当DTAB浓度为15mM时，粗酶活性提高最大为50％。从以上数据可知，传统表面活性剂的用量较多，且对酶活性的调控作用也不够明显。

发明内容

本发明将Gemini表面活性剂与传统单链表面活性剂进行复配，探究了表面活性剂复配体系对多酚氧化酶活性的影响，以期寻找协同效应较好的复配体系，以降低表面活性剂的用量，拓展其应用范围。

本发明的目的在于提供一种能够更大程度提高苹果多酚氧化酶活性的促进剂，及利用该促进剂提高苹果多酚氧化酶活性的应用。

本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种苹果多酚氧化酶活性促进剂，包括十二烷基三甲基溴化铵或十六烷基三甲基溴化铵与Gemini表面活性剂以重量比为10～2000:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性剂为二溴化-双(二甲基十二烷基)戊二铵或二溴化-双(二甲基十六烷基)戊二铵。

优选的，所述苹果多酚氧化酶活性促进剂，包括十二烷基三甲基溴化铵与Gemini表面活性剂以重量比为200～2000:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性剂为二溴化-双(二甲基十二烷基)戊二铵或二溴化-双(二甲基十六烷基)戊二铵。

优选的，所述苹果多酚氧化酶活性促进剂，包括十六烷基三甲基溴化铵与Gemini表面活性剂以重量比为10～100:1～4比例混合的混合物，所述Gemini表面活性剂为二溴化-双(二甲基十二烷基)戊二铵或二溴化-双(二甲基十六烷基)戊二铵。

本发明还包括采用上述促进剂提高苹果多酚氧化酶活性的应用，提取苹果多酚氧化酶粗酶液，在所述促进剂存在的条件下，以多酚氧化酶为催化剂进行催化反应。

优选的，在所述催化反应体系中，所述促进剂在所述催化反应体系中的浓度分别为：十二烷基三甲基溴化铵或十六烷基三甲基溴化铵0.1～20mM，Gemini表面活性剂5～45μM。

优选的，所述催化反应体系中，还包括底物邻苯二酚和溶解所述底物的磷酸盐缓冲溶液，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.0～8.0。

优选的，所述催化反应的温度为30℃～50℃。