[发明专利]一种炎症分子（PSGL‑1）缺失的脂代谢异常模型的构建及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种转基因动物模型的构建方法及其应用，特别涉及一种新型的炎症分子(PSGL-1)缺失合并脂代谢异常的转基因动物模型的构建方法及应用。

背景技术

随着人们饮食和生活习惯的改变，代谢性疾病的发生率呈逐年增长趋势。脂代谢异常可导致高血压和动脉粥样硬化等疾病，严重威胁人类健康。研究表明炎症分子与脂代谢异常的发生和发展关系密切，炎症贯穿整个疾病发生发展的过程，但是目前有关炎症与脂代谢的研究仅仅局限于细胞和临床组织水平，而缺乏用于动态整体研究的炎症分子合并脂代谢异常的小鼠工具模型。低密度脂蛋白受体基因敲除(LDLR^-/-)小鼠是研究脂代谢异常的经典模型，粘附分子敲除的小鼠模型常用来研究疾病与炎症有关的分子机制。本项目拟利用现有基因工程小鼠平台的炎症分子((PSGL-1))缺失小鼠与脂代谢异常LDLR^-/-小鼠进行杂交，旨在获得(PSGL-1)缺失背景下的脂代谢异常模型，为系统研究炎症分子与脂代谢的相互关系，寻找新的药物靶标和治疗方法提供一种新的研究载体，为基因工程小鼠模型的深入开发提供示范。

转基因动物已成为新兴的最有效的动物实验模型。与普通实验小鼠相比，基因工程小鼠具有无法比拟的优势：疾病的发生是自然形成的，可模拟人类疾病的体内发生过程，研究结果更加真实可靠；能够进行动态连续观察，克服了临床研究的局限性。LDLR^-/-基因工程小鼠是一个经典的脂代谢异常小鼠模型，通过敲除低密度脂蛋白受体基因，导致LDLR功能缺陷，血浆中LDL-C水平升高，诱发动脉粥样硬化及肝脏脂肪变性等。其疾病形成机理与临床十分相似。大量证据表明动脉粥样硬化等脂代谢疾病本质上是一种炎症性疾病，炎症分子的表达与血脂紊乱及主动脉病变密切相关。但是，目前还缺乏良好的模型用来研究炎症与脂代谢紊乱的关系。(PSGL-1)是一个重要的粘附分子，P选择素/(PSGL-1)的相互作用介导中性粒细胞一血小板、中性粒细胞一内皮细胞等细胞间反应，活化血小板、促进血栓形成，参与内皮损伤、介导炎症细胞黏附从而又使脂质沉着，同时(PSGL-1)可以转导胞外信号，促进白细胞活化并使其稳定黏附。P选择素/(PSGL-1)相互作用在动脉粥样硬化(atherosc1erosis，AS)的形成及稳定中起着重要作用，提示了其对心血管疾病的重要意义。我们拟利用这两种小鼠进行杂交，获得(PSGL-1)^-/-,LDLR^-/-小鼠模型，为研究者提供有应用价值的、适于研究炎症与代谢性疾病关系的工具模型，同时为基因工程小鼠创新模型的深入开发提供示范，具有良好的应用价值和社会意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型的炎症分子缺失合并脂代谢紊乱的小鼠模型的构建方法。

本发明的另一个目的在于提供上述动物模型的应用。

本发明所采取的技术方案是：

本发明构建的(PSGL-1)^-/-,LDLR^-/-小鼠模型，其(PSGL-1)蛋白的表达量缺失后并不影响小鼠的正常生活。

发明人通过研究发现，转基因工程动物LDLR^-/-,(PSGL-1)^-/-小鼠在高脂饲饮食12周后，对比LDLR^-/-小鼠，LDLR^-/-,(PSGL-1)^-/-小鼠血清中的总胆固醇和低密度脂蛋白的含量降低，高密度脂蛋白明显升高；通过对肝脏的HE染色发现，对比LDLR^-/-小鼠，LDLR^-/-,(PSGL-1)^-/-小鼠肝小叶脂肪变性明显减轻，肝脏中的总胆固醇和甘油三酯也有明显的降低；通过对主动脉和主动脉根部的油红O染色发现，对比LDLR^-/-小鼠，LDLR^-/-,(PSGL-1)^-/-小鼠主动脉和主动脉根部斑块沉积显著降低。研究表明：(PSGL-1)蛋白的表达量减少能够减轻LDLR^-/-小鼠体内脂代谢异常状态，该模型能够有效地用来研究炎症分子与脂代谢的关系，可用于代谢性疾病炎症机制的研究。

附图说明

图1是(PSGL-1)的结构及结合示意图；

图2是小鼠鉴定图；

图3是LDLR^-/-与LDLR^-/-,(PSGL-1)^-/-小鼠的血脂测量；