[发明专利]一种皮质醇的核酸适配体及检测皮质醇的金标试纸条

权利要求书

1.一种皮质醇的核酸适配体，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的核酸适配体，其特征在于：5’端经过巯基修饰。

3.一种与权利要求1所述的核酸适配体互补配对的互补探针A，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根据权利要求3所述的互补探针A，其特征在于：5’端经过生物素修饰。

5.一种检测皮质醇的金标试纸条，其特征在于：包含样品玻璃纤维膜、核酸探针金标垫、硝酸纤维膜、吸水玻璃纤维膜和塑料衬板；所述的核酸探针金标垫上附着胶体金标记的皮质醇的核酸适配体；所述的硝酸纤维膜上划有检测线和参照线，检测线由皮质醇-牛血清蛋白偶联物溶液划成，参照线由结合了链霉亲和素的生物素修饰的互补探针A溶液划成；样品玻璃纤维膜、核酸探针金标垫、硝酸纤维膜、吸水玻璃纤维膜依次搭接粘贴在塑料衬板上，硝酸纤维膜的参照线靠近吸水玻璃纤维膜一端。

6.根据权利要求5所述的金标试纸条，其特征在于：所述的胶体金标记的皮质醇的核酸适配体通过包括如下步骤的方法制备：将醋酸缓冲液和TCEP溶液混合，再向其中加入权利要求2所述的核酸适配体，进行巯基活化反应，反应结束后向其中加入金纳米粒子溶液，震荡反应0.5～1.5小时；再加入dATP，18～25℃震荡反应10～30分钟后静置20～40分钟，再在2～8℃下静置4～6小时；然后离心，沉淀即为胶体金标记的皮质醇的核酸适配体。

7.根据权利要求6所述的金标试纸条，其特征在于：所述的方法中，醋酸缓冲液的浓度为0.1～0.6mol/L，pH值4.0～6.0，用量1～5μL；TCEP溶液的浓度为1～10mmol/L，用量1～10μL；核酸适配体的浓度为1～100μmol/L，用量1～10μL；金纳米粒子溶液的浓度为6～10OD值，金纳米粒子粒径为30～40nm，用量50～100μL；dATP的浓度为1～10μmol/L，用量50～100μL。

8.根据权利要求5所述的金标试纸条，其特征在于：所述的结合了链霉亲和素的生物素修饰的互补探针A溶液通过包括如下步骤的方法制备：将40～80μL 1～10OD值权利要求4所述的互补探针A溶液和200～300μL 1～5mg/mL的链霉亲和素溶液混合后在18～30℃下静置1～3小时，再向其中加入500～600μL 0.001～1.000M pH值6.0～8.0的磷酸盐缓冲溶液。

9.权利要求5～8任一所述的金标试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：制备核酸探针金标垫、划有检测线和参照线的硝酸纤维膜；将样品玻璃纤维膜、核酸探针金标垫、硝酸纤维膜和吸水玻璃纤维膜依次搭接粘贴到塑料衬板上。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：相邻两粘贴物之间的重叠部分长度为1～3mm。