[发明专利]用于肿瘤治疗的双特异性抗体和抗体偶联物及其应用

说明书

本发明提供一种双特异性抗体，其包含抗MUC1 VHH的抗体片段和抗CD16 VHH的抗体片段。本发明使用的抗体片段为来自骆驼重链抗体的可变区序列，与抗原具有高结合亲和性。本发明将识别MUC1和识别CD16的抗体片段构建在同一抗体分子中，可以特异性结合MUC1和CD16分子，促进NK细胞对MUC1阳性表达细胞的杀伤作用，对MUC1阳性肿瘤的生长起到抑制的作用。本发明还提供所述双特异性抗体的偶联物、相关的药物组合物和应用。

技术领域

本发明涉及一种双特异性抗体及其制备，更具体地，涉及抗MUC1和抗CD16的双特异性抗体，用于肿瘤治疗领域。

背景技术

肿瘤免疫治疗中，双特异抗体(bispecific antibody,bsAb)在其中起到了非常重要的作用。双特异抗体是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，通过结合位点，可同时结合效应细胞与靶细胞表面的特异性抗原，激活静止状态的效应细胞并募集到靶细胞周围，介导靶细胞的凋亡或裂解。已开发出多种靶向不同免疫效应细胞和肿瘤细胞的bsAb，其中在肿瘤免疫治疗中的主要免疫效应细胞为T细胞、NK细胞和巨噬细胞等。NK细胞和T细胞是目前研究较多的效应细胞。

在T细胞表面具有引发作用的分子，包括CD2、CD3、CD28等，因此在构建用于肿瘤治疗的双特异抗体时，通常都包括识别这些分子的特异性，其中基于CD3和CD28的双特异抗体研究较多。BiTE(双特异T细胞募集者)是一种双特异抗体的形式，能通过抗CD3的单链抗体片段最大程度的介导T靠近肿瘤细胞，进而发挥裂解肿瘤的作用。当前，有几种靶向BiTE正在研发之中，比如CD19(针对B细胞癌)、上皮细胞粘附分子(EpCAM，CD326)，前列腺特异膜抗原(PSMA)，以及MUC1。MEDI-565，又名MT111或AMG211，是一种BiTE抗体，能介导T细胞杀伤表达MUC1的肿瘤细胞，且与肿瘤细胞系的突变状态无关。现在该药物正处于临床I期实验(ClinicalTrails.gov,NCT02291614)中，用于治疗晚期结肠腺癌。虽然取得了这些进步，但是双特异抗体主要的挑战仍然存在，例如提高制造效率，保留免疫原性，降低毒性，和增加半衰期。

自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)是体内免疫中的重要组成部分，在天然免疫中识别外界抗原，进而直接清除。其杀伤作用具有MHC非限制性，多种肿瘤细胞对NK细胞介导的杀伤作用敏感。其表面特异性分子CD16，是一种分布于NK细胞，中性粒细胞和单核细胞、巨噬细胞等表面的低亲和力Fc受体。CD16通过结合IgG的Fc区域，可以激活NK细胞产生ADCC。bsAb分子上的抗CD16抗体结合位点，可以在两个方面增加NK细胞基础上的免疫治疗作用：(1)作为肿瘤部位的锚定分子，募集NK细胞，使得局部NK细胞数量增加，延长肿瘤细胞与NK的接触时间，增强NK细胞的杀伤作用；(2)在肿瘤部位激活NK细胞，进而杀伤肿瘤细。目前已有多种结合CD16与肿瘤相关抗原的双特异抗体在研究之中，比如靶向Her2的乳腺癌，CD33，CD20等。其中靶向CD30和CD16的双特异抗体AFM13，用于治疗顽固性和/或再发性霍奇金淋巴瘤已经进入临床试验(clinicaltrials.gov identifier:NCT01221571)。

MUC1是Mucins黏蛋白家族成员，存在正常腺管上皮细胞及其来源的肿瘤细胞表面,由多肽核芯(核芯肽)和侧枝糖链构成。其核芯肽胞外段含有许多20个氨基酸(SAPDTRPAPGSTAPPAHGVT)的串联重复序列(vriable numbers tandem repeats,VNTRs)。正常组织MUC1与肿瘤组织不同，前者分布于腺管上皮细胞分泌极，与免疫细胞相对隔离，糖基化丰富；而后者广泛分布并异常丰富地表达于癌细胞表面,糖基化不完全，因此暴露出正常情况下隐蔽的表位，成为免疫细胞攻击的靶点。MUC1核芯肽的PDTRP表位既能被多种MUC1抗体识别，也可被CTL细胞识别和杀伤。

另外，双特异性抗体可能具有较差的药代动力学和物理性质(诸如免疫原性)以及和制造上的困难。因此，需要对这样的现有技术的改善或替代技术。

发明内容