[发明专利]一种检测猪乙型脑炎病毒抗体的试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测猪乙型脑炎病毒抗体的试剂盒，该试剂盒为化学发光酶免疫试剂盒，包括抗原蛋白，所述抗原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示或在其N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；抗原蛋白的包被浓度为0.5‑2μg/mL，包被液为0.05mol/L pH9.6 NaCO₃‑NaHCO₃缓冲液。本发明的试剂盒能够用于临床样本中猪JEV NS1抗体的快速检测。与商品化ELISA试剂盒相比，本方法试剂盒较目前应用最为广泛的ELISA试剂盒灵敏度大幅提升，从而降低了漏检率，而且精密度也更高，为我国猪群中乙型脑炎的流行病学调查提供了敏感的检测手段，可用于猪乙型脑炎病毒感染的早期诊断。

技术领域

本发明涉及一种CLEIA检测试剂盒，具体地说是一种检测猪乙型脑炎病毒抗体试剂盒。

背景技术

乙型脑炎(Japanese encephalitis,JE)又称流行性乙型脑炎，日本乙型脑炎，由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)引起的一种严重的人畜共患虫媒疾病。三带喙库蚊为其主要的传播媒介。该病具有明显的季节性和地理分布，主要分布在东南亚各地区，流行区域有进一步扩大的趋势。乙型脑炎病毒为单股正链RNA病毒，属于黄病毒科黄病毒属。JEV可以感染人和多种动物，人类感染后主要引起中枢神经系统性疾病。猪为该病毒的主要贮藏宿主，在人类感染JEV的过程中，充当着隐性传染源及预警动物的职责。及时监测猪群中JEV的感染状况，能够为人类乙型脑炎防控措施的制定提供相应的参考。

目前没有有效的药物可用于治疗JEV感染的人或者动物。乙型脑炎的防治工作主要是灭蚊，避免蚊虫叮咬和免疫接种。由于控制蚊虫难度较大，疫苗免疫是预防乙型脑炎的主要措施。目前，国际上应用最多的乙脑疫苗为鼠脑纯化灭活疫苗，国内应用的为SA14-14-2乙脑减毒活疫苗。乙脑的临床诊断主要依靠血清学检测。一般的检测方法由于灵敏度差很难达到准确诊断的目的。

发明内容

针对上述不足，本发明提供一种用于检测猪乙型脑炎病毒抗体的试剂盒，其操作简单，灵敏度高，特异性强，稳定性和重复性好，避免漏检，具有良好的应用前景。

本发明提供的一种检测猪乙型脑炎病毒抗体的试剂盒，包括抗原蛋白或抗原蛋白溶液，所述抗原蛋白的氨基酸序列为如下a或b或c：

a.SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

b.在其N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c.SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由SEQ ID NO.2衍生的蛋白质。

编码SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的NS1重组蛋白(SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列)是以pCMV-NS1质粒为模板，PCR扩增猪乙型脑炎病毒(JEV)SA14-14-2非结构蛋白NS1的基因序列，克隆入pGEX-6p-1载体，转化E.coli BL21(DE3)，PCR鉴定并筛选阳性重组菌，SDS-PAGE观察重组菌中目的蛋白的表达情况，质谱鉴定融合表达的目的蛋白，并应用谷胱甘肽琼脂糖凝胶(Glutathione-Sepharose beads 4B)购自美国GE公司对重组蛋白进行纯化得到。