[发明专利]一种抗氧化肽及其分离制备方法和用途

权利要求书

1.一种多肽，其特征在于氨基酸序列为Pro-Ala-Tyr-Cys-Ser。

2.权利要求1所述多肽的分离制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将凤尾鱼去头去内脏，绞成肉糜，加水混合，加入混合酶，在45~60 ℃下酶解6~10 h后，灭酶，冷却至室温后，离心，过滤收集滤液，为凤尾鱼酶解液；

步骤（1）所述的混合酶，由木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶组成；所述的木瓜蛋白酶占肉糜质量的0.2~0.5%；所述的碱性蛋白酶占肉糜质量的0.3~0.7%；

（2）将凤尾鱼酶解液添加至Sephadex G-25 凝胶柱，用去离子水以0.5~1.5 mL/min的流速进行洗脱，检测波长为220 nm，收集各洗脱峰并分别测定其超氧阴离子自由基清除能力，选取超氧阴离子自由基清除能力最高的组分进行下一步分离；

（3）采用反相高效液相色谱对步骤（2）选择的目标组分进一步纯化，收集各洗脱峰并测定其超氧阴离子自由基清除能力，超氧阴离子自由基清除能力最高的组分采用电喷雾串联质谱测定，得到多肽Pro-Ala-Tyr-Cys-Ser；

步骤（3）所述的反相高效液相色谱采用以下参数：Waters e2695 HPLC，2998 PDA 检测器，色谱柱为XBridge^TM Prep BEH130 C18柱，流动相为A 相和B 相；A相是质量分数0.1% 的三氟乙酸超纯水溶液，B相为甲醇；

洗脱程序为：0-1min内采用的流动相中A与B 体积比为（95:5）-（90:10）；1-35 min内采用的流动相中A与B体积比为（95:5）-（60:40）或（90:10）-（70:30）；35-36 min 内采用的流动相中A与B体积比为60:40；36-40 min内采用的流动相中A与B体积比为（60:40）-（95:5）或（60:40）-（90:10），流速为1 mL/min，检测波长为220 nm。

3.根据权利要求2所述的分离制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的加水混合，水与肉糜的质量比为（1~ 3）:1。

4.根据权利要求2所述的分离制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的灭酶是将反应物在95 ℃下加热15 min。

5.根据权利要求2所述的分离制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的离心是在3500 r/min转速下离心10 min。

6.权利要求1所述的多肽在制备具有抗氧化功效的药品、保健品或食品中的应用。