[发明专利]用于抑制VEGFA靶基因mRNA表达的寡核酸分子及其成套组合物

说明书

本发明公开了一种用于抑制VEGFA靶基因mRNA表达的寡核酸分子及其成套组合物。本发明提供了siRNA，由19‑27个核苷酸组成的正义链和与其反向互补的反义链组成；所述正义链中从5’末端起5‑9个连续核苷酸和从3’末端起5‑9个连续核苷酸均为2＇－核糖修饰核苷酸。本发明中siRNA分子混合物可以影响至少50％、55％、60％、65％、70％,75％、80％、85％、90％的细胞中靶基因的表达，抑制率至少为45％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％。

本申请是申请日为2016-08-18，申请号为201610687850.2，发明名称为“一种用于抑制靶基因mRNA表达的寡核酸分子及其成套组合物”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种用于抑制靶基因mRNA表达的寡核酸分子及其成套组合物。

背景技术

自AndrewFire和Craig Mello等人1998年在线虫(Caenorhabditis elegans)中首次发现RNAi现象，Tuschl和Phil Sharp等人2001年证实在哺乳动物中也存在RNAi之后，关于RNAi的机制原理、基因功能和临床应用等研究取得了一系列的进展。RNAi不仅在防御病毒感染，防转座子跳跃等多种机体保护机制中发挥关键作用(Huntvagner et al,2001；Tuschl,2001；Waterhouse et al,2001；Zamore 2001)，其相关产品也是十分有前景的候选药物。

Elbashir等人在2001年发现siRNA抑制哺乳动物细胞中特异基因的沉默，研究表明siRNA可特异的同序列互补的靶mRNA结合，并使其降解。长片段的双链RNA被Dicer酶切割成21-23个碱基长度短片段RNA，其中两条链中同靶mRNA结合的链称为反义链或引导链，另一条链称为正义链或过客链。研究发现体外化学合成的siRNA进入细胞后也同样发挥RNAi作用，而且有效降低了长链RNA引起的免疫反应。

但由于siRNA的有效性受序列特异性，靶细胞特异性、靶点等多种因素影响，基于现有设计原则获得的siRNA并不是每个都能达到有效的沉默效果；一般设计的siRNA约有50％以上具有沉默靶mRNA的效果，仅25％的siRNA具有75％以上的沉默效果，因此后续对设计合成的siRNA还需要实验验证、筛选或优化，费时耗力；基于此，一种通用、高效、快速的RNAi技术与产品亟待开发。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种抑制或降低VEGFA靶基因表达的siRNA。

本发明提供的siRNA，由正义链和与其反向互补(完全反向互补)的反义链组成；

所述正义链由19-27个核苷酸组成，且所述正义链从5’末端起5-9个连续核苷酸和从3’末端起5-9个连续核苷酸均进行2＇-O-核糖修饰。

所述反义链与所述靶基因上的区段反向互补，所述靶基因为VEGFA；

所述正义链的碱基组成序列选自SEQ ID NO.1,SEQ ID NO.3,SEQ ID NO.5,SEQID NO.7,SEQ ID NO.9，SEQ ID NO.11,SEQ ID NO.13；

所述反义链的碱基组成序列选自SEQ ID NO.2,SEQ ID NO.4,SEQ ID NO.6,SEQID NO.8,SEQ ID NO.10，SEQ ID NO.12,SEQ ID NO.14。

siRNA通过其反义链与靶基因上的靶序列反向互补结合；