[发明专利]一株产三萜类化合物的滴孔菌及其应用

说明书

本发明公开了一株产三萜类化合物的滴孔菌，该菌株名为滴孔菌(Piptoporus sp.)A‑9，菌株已于2017年5月25日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC N0.13895。本发明还公开了所述滴孔菌在制备三萜类化合物中的应用。实验证实利用本发明所述滴孔菌发酵生产三萜类化合物的产量最高可达2.1g/L以上，其为液体发酵生产三萜类化合物探索了新的方向与途径，具有较高的应用价值，工业化应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及一株产三萜类化合物的滴孔菌及其在制备三萜化合物中的应用，属于生物技术领域。

背景技术

近年来，食药用高等真菌越来越受到广泛关注，不仅因为它具有极高的营养价值，更重要的是其能够产生具有各种生物活性的次级代谢产物。高等真菌次级代谢产物中，药理作用研究较清楚的是三萜类化合物，近年的研究表明，三萜类化合物具有抗肿瘤、抗艾滋病病毒HIV-1、解毒保肝、抗菌和抑制前列腺增生等功能。

目前对三萜类化合物产生菌的研究主要集中在灵芝菌科Ganodermatoideae和多孔菌科Polyporaceae。由于高等真菌的子实体培养周期较长，三萜的产量受外界因素影响较大，因此，从子实体中提取三萜酸成分具有较大的局限性。通过液体深层发酵技术生产三萜类化合物具有生产周期短、不受季节影响、可以大批量生产、三萜类化合物含量相对稳定，适合工厂化生产等特点，有望成为生产三萜类化合物的主要方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一株可产三萜类化合物的滴孔菌菌株及其在制备三萜类化合物中的应用。利用本发明所述菌株可以产生三萜类化合物，实现通过微生物液体发酵法获得以三萜类化合物为主要目的产物的愿望。

本发明所述产三萜类化合物的滴孔菌A-9属于多孔菌科滴孔菌属，其特征在于：该菌株名为滴孔菌(Piptoporus sp.)A-9，菌株已于2017年5月25日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC N0.13895。

上述产γ-癸内酯及三萜类化合物的滴孔菌A-9是一株发明人自主野外采摘分离纯化得到的滴孔菌，其生物学特征是：子实体无柄，呈现半圆形，大小约20×15cm，单片菌盖厚度约0.5-1.5cm，菌盖覆瓦状排列。子实体正面呈现淡黄色至橙色，边缘颜色较深，呈现波浪状或瓣状，较圆滑，子实体背面呈现白色，边缘黄色，布满菌孔。菌丝系统二体型，具有生殖菌丝和骨架菌丝。生殖菌丝具有担子菌菌丝的显著特点，即锁状联合。同时该菌生殖菌丝还具有简单隔膜，但是简单隔膜的数量较少，且往往出现于菌丝的前端。生殖菌丝的直径从2-3μm到5-7μm不等。

对本发明所述产三萜类化合物的滴孔菌A-9CGMCC N0.13895测定18S rRNA 以及ITS的基因序列的结果显示，其18S rDNA序列长度为1679bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；其ITS序列片段大小为727bp，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。通过形态观察和18SrRNA以及ITS的基因序列比对，初步鉴定为Piptoporus sp.。

本发明所述产三萜类化合物的滴孔菌A-9菌种选育的基本方法是：

菌种系采自于野外的担子菌子实体。将新鲜的子实体以无菌手术刀切开，用眼科镊子撕取少许菌肉接种于PDA平板，30℃培养。待菌丝垫直径达2-3厘米时，从菌丝边缘挑取少许菌丝接种于新的PDA平板，经反复多次转接，直至分离得到纯菌种。将该菌株命名为滴孔菌(Piptoporus sp.)A-9，该菌株已于2017年5月25日保藏在“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏号为CGMCC N0.13895。

本发明所述产三萜类化合物的滴孔菌(Piptoporus sp.)A-9在制备三萜类化合物中的应用。

其中，所述应用方法涉及的步骤顺序如下：