[发明专利]一种叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的定量检测方法

说明书

本发明提供了一种叶酸功能化二氧化硅靶向纳米药物载体的定量检测方法，基于抗原和抗体的特异性结合采用间接竞争酶联免疫法达到检测抗原或抗体的目的；且利用酶标二抗放大检测信号的作用，从而提高了实验分析的灵敏度。步骤包括：制备SiO₂‑FO包被抗原和免疫原，将免疫原注射到动物体内得到高特异性抗体，然后建立间接竞争酶联免疫法对SiO₂‑FO的含量进行了检测分析。本发明检测方法快速准确、操作简单、检测限低、可进行高通量测定。

技术领域

本发明涉及纳米材料的定量检测，具体涉及一种叶酸功能化二氧化硅(SiO₂-FO)靶向纳米药物载体的定量检测方法。

背景技术

恶性肿瘤严重威胁着人类的健康。在癌症的治疗中，药物治疗是一个很重要的环节，抗癌药物的有效使用可以帮助患者获得更长的生存时间。抗癌药物的研发一直是科学家关注的焦点之一，但是许多抗癌药物的溶解性低、稳定性差、易被快速代谢和清除、有副作用、缺少靶向功能等，在治疗的过程中很难充分发挥药效，已逐渐不能满足临床用药的需求。因此，无论是从人类健康，还是从社会发展的角度，发展新的技术和手段实现肿瘤有效治疗具有十分重要的意义。

随着纳米技术的发展，以及各学科间的交叉融合，具有特殊物理化学性质的纳米材料在肿瘤的治疗方面显示出广阔的应用前景。近年来，肿瘤靶向药物载体系统成为众多学者研究的热点。靶向纳米药物载体的突出优点在于：①控制药物进入特定的靶器官或靶细胞，靶向输送药物；②缓释药物，延长药物作用时间；③提高制剂的稳定性及口服生物利用度；④载体材料可生物降解，无毒或毒性较低。理想的药物载体还应具有载药量大、在体内有一定的循环时间等特点。

无机纳米材料作为药物载体具有更高的药物包载率，更好的化学稳定性和生物相容性，因而更适合作为药物载体。在众多的无机纳米材料中，介孔二氧化硅(SiO₂)纳米颗粒具有大的比表面积、大的介孔体积、良好的生物相容性，并且表面易修饰等特点，因而将其作为药物载体具有诱人的应用潜力和广阔的应用前景。叶酸(FA)是一种小分子维生素，与其他靶向分子如单克隆抗体相比，FA相对分子质量小、无免疫原性、价廉易得、稳定性好、与药物或载体之间的化学键合简单易行，且FA受体在多数肿瘤细胞膜表面过度表达，通常比正常细胞系高出20～200倍。利用FA的靶向性及其与FA受体的特异性，将FA修饰到SiO₂纳米材料上作为靶向纳米药物载体，与FA复合物相比，FA修饰的纳米递药系统具有易于解离释放药物，可穿过生物屏障发挥药效等优点，尤其FA分子暴露在最外面，从而能最充分地接触肿瘤细胞。因此叶酸功能化二氧化硅(SiO₂-FO)作为靶向药物载体在医药领域具有广阔的应用前景。

纳米生物技术是生物技术领域的前沿和热点问题，从现有研究结果来看，对于纳米材料应用于医学领域通常局限于考察其在体内的分布、降解、药物释放效率以及毒性研究等方面。众所周知，纳米材料因其特殊的效应对人体可能有一定的影响，不同的剂量可能对机体产生不同的功效或副作用。因此，纳米药物载体的剂量检测对于考察该材料是否可以应用于临床显得尤为重要。而目前对于纳米材料的表征方法主要集中在其结构、成分、粒度、形貌以及界面等分析。而对于纳米材料的定量分析还不是很多，目前常用的方法有电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)以及气相色谱-电感耦合等离子体质谱法(GC-ICP-MS)，然而这些方法不仅操作繁琐，仪器昂贵，而且稳定性和灵敏度都不高，检测技术仍不够成熟。因此，对于纳米载体本身在生物体内的定量检测仍是一项十分必要且具有挑战性的工作。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种叶酸功能化二氧化硅(SiO₂-FO)靶向纳米药物载体的定量检测方法。利用抗原抗体的特异性结合采用间接竞争酶联免疫法从而实现了对SiO₂-FO含量的快速检测。该方法具有快速准确、操作简单、检测限低、可进行高通量测定等特点。