[发明专利]一种二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物学免疫方法的测定技术领域，具体涉及一种二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

二亚甲基双氧安非他明俗称摇头丸(MDMA)，是安非他明类衍生物，是亚甲二氧基甲基苯丙胺的片剂，属中枢神经兴奋剂，是中国规定管制的精神药品。摇头丸是一种人工合成的致幻性苯丙胺类毒品，对中枢神经系统有很强的兴奋作用，服用后表现为活动过度、情感冲动、性欲亢进、嗜舞、偏执、妄想、自我约束力下降以及有幻觉和暴力倾向，具有很大的社会危害性。

国内外有关MDMA的检测主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效薄层色谱法(HPTLC)、酶联免疫法等方法，上述方法虽然虽然检测的灵敏度较高，但对仪器设备、检测材料、实验人员的要求度都很高，不适合高通量、现场的快速检测。因此研究具有快速、便携等优点的检测方法具有现实意义。

发明内容

本法公开了一种二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒及其制备方法，能够快速的检测出尿液中的二亚甲基双氧安非他明含量是否超标，方便携带，适用于大众场合的现场检测。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒，包括：样品垫、胶体金垫、检测垫、吸水垫和PVC塑料薄板，所述样品垫、胶体金垫、检测垫、吸水垫依次粘贴在PVC塑料薄板上；所述胶体金垫为聚酯纤维膜并包被了二亚甲基双氧安非他明抗体的胶体金标记物，所述检测垫为硝酸纤维素膜并依次包括由二亚甲基双氧安非他明抗原包被的检测线(T线)和由羊抗兔多克隆抗体包被的质控线(C线)。

优选地，所述样品垫为玻璃纤维布。

优选地，所述胶体金颗粒大小为40nm，胶体金包被浓度为OD35-OD55，包被量0.5-1.5μl/cm。

优选地，所述二亚甲基双氧安非他明抗原的浓度0.3-0.5mg/ml，包被量0.8μl/cm-1.2μl/cm。

优选地，所述羊抗兔多克隆抗体的浓度为0.6-1.0mg/ml，包被量0.8μl/cm-1.2μl/cm。

一种二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：将二亚甲基双氧安非他明抗体用胶体金标记包被于聚酯纤维膜上，干燥后制得胶体金垫；将二亚甲基双氧安非他明抗原用点膜机点于硝酸纤维素膜的检测线(T线)上并干燥，将羊抗兔多克隆抗体用点膜机点于硝酸纤维素膜的质控线(C线)上并干燥，制得检测垫；将样品垫、胶体金垫、检测垫、吸水垫复合粘贴在PVC塑料薄板上；将复合好的塑料薄板置于切割机上，切割成单人份试纸；将单人份试纸装入配套使用的塑料盒内；将塑料盒、干燥剂放入铝箔袋内，封口、待检；待检品抽检其灵敏度、特异性和稳定性合格出厂。

优选地，所述胶体金垫的干燥条件为37℃下干燥4-24小时。

优选地，所述检测线(T线)的干燥条件为45℃下干燥24小时。

优选地，所述质控线(C线)的干燥条件为37℃下干燥4-24小时。

本发明二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒的使用方法为：将试剂盒从铝箔袋取出后1小时内使用，使用时在样品垫处加入90μl-240μl尿液样本，3-5分钟之内判读结果，C、T线同时出现为阴性，只出现C线为阳性，只出现T线测试无效；若温度高于30℃或者处于高湿条件下，应立即使用。

本发明二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒的使用原理为：当滴入待测尿液样品时，由于毛细作用，样品将沿着试纸向吸水垫层析移动，尿液样品中的二亚甲基双氧安非他明抗原与胶体金垫中的二亚甲基双氧安非他明抗体结合发生特异反应，当移动至检测线T时，由于胶体金垫中的二亚甲基双氧安非他明抗体与样品中的二亚甲基双氧安非他明抗原结合而无法与检测线T上的二亚甲基双氧安非他明抗原结合，因此胶体金无法滞留于检测线T上，即T线不显色；相反，如果样品中没有与胶体金垫中的二亚甲基双氧安非他明抗体结合的二亚甲基双氧安非他明抗原，则胶体金滞留于检测线T上，T线显色。当移动至质控线C时，无论样品中是否含有二亚甲基双氧安非他明抗原，胶体金标记物均会与包被在C线上的羊抗兔多克隆抗体结合显色，从而判定是否有足够样本，层析过程是否正常。

本发明设定了尿液中的二亚甲基双氧安非他明浓度界限值为500ng/ml：超过500ng/ml，C线显色，结果为阳性；低于500ng/ml，C、T线同时显色，结果为阴性；只出现T线，测试无效。