[发明专利]用于提取丙型肝炎病毒RNA的试剂盒

说明书

本发明涉及用于提取丙型肝炎病毒RNA的试剂盒。本发明属于生物医学检测领域，涉及核酸纯化技术，特别是提取丙型肝炎病毒RNA的技术。本发明的试剂盒通过盐酸胍与柠檬酸缓冲体系的组合，实现了以高安全性、高灵敏度、高稳定性对样品中丙型肝炎病毒RNA进行高效提取的技术效果。

技术领域

本发明属于生物医学检测领域，涉及核酸纯化技术，特别是提取丙型肝炎病毒RNA的技术。

背景技术

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis virus C，HCV)感染引起的病毒性肝炎。由于目前尚未确立丙型肝炎的预防方法，并且部分丙型肝炎患者可发展为肝硬化甚至肝癌，所以HCV感染的早期发现与早期治疗非常重要。

目前临床上常用的HCV检测方法主要有两类：免疫学方法测定抗HCV或HCV编码蛋白，PCR法检测丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)。免疫学方法存在其自身的局限性：窗口期长(50-70天)，而且只代表既往感染，可在病毒清除后仍长时间存在。血清中的HCV-RNA是病毒复制和肝炎进程的确切标志，因此与免疫学诊断相比，核酸诊断具有更高的灵敏度和特异性，大大缩短了检测的窗口期，同时漏检概率极大缩小。

由于HCV感染者血清病毒滴度通常很低，而且病毒核酸极易降解，所以RNA 提取方法对丙型肝炎病毒RNA定量检测的效果有较大的影响。因此，能够从微量样本中高效回收HCV病毒RNA的方法能够进一步改善样本中HCV-RNA的定量检测灵敏度。另外，经典的RNA提取方法往往会用到有毒试剂如异硫氰酸胍、苯酚、氯仿等，这也是其难以避免的固有缺陷之一。

发明内容

本发明提供了一种具有高安全性、高灵敏度、高稳定性的丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)高效提取试剂盒。

本发明的试剂盒主要包含以下组分：

核酸提取试剂2(裂解液)：盐酸胍40-70g/100mL，曲拉通(TX-100) 2％-20％(v/v)，柠檬酸0-2g/L，柠檬酸钠0-15g/L，pH 4.0-7.0，优选的，盐酸胍50-60g/100mL，曲拉通10-20％(v/v)，柠檬酸1-2g/L，柠檬酸钠10- 15g/L，pH 4.0-6.0；

核酸提取试剂4(洗涤液I)：盐酸胍10-50g/100mL，柠檬酸0-2g/L，柠檬酸钠0-20g/L，异丙醇20％-60％(v/v)，pH 4.0-7.0，优选的，盐酸胍20- 40g/100mL，柠檬酸1-2g/L，柠檬酸钠10-20g/L，异丙醇30％-50％(v/v)， pH 4.0-6.0；

核酸提取试剂5(洗涤液II)：氯化钠5-20g/L，曲拉通(TX-100)0- 5％(v/v)，优选的，氯化钠5-15g/L，曲拉通(TX-100)0-3％(v/v)。

配制得到的试剂均为无色透明液体，2℃-8℃保存，效期18个月。根据需要，可向核酸提取试剂5中添加生物防腐剂，优选PC-300，最优选 200μL/L PC-300。

本发明人惊讶地发现，通过上述盐酸胍与柠檬酸缓冲体系的组合，提供了对HCV-RNA的高安全性、高灵敏度、高稳定性的提取。

本发明的试剂盒还可包含核酸提取试剂3：磁珠，10-50mg/mL，优选的25mg/mL。

另外，本发明的试剂盒还可包含以下组分：

核酸提取试剂1：蛋白酶K 10-40mg/mL，优选的20mg/mL；

核酸提取试剂6：矿物油50-100％(v/v)，优选的，矿物油70-100％(v/v)；

核酸提取试剂7：Tris(pH 8.0)1-50mM，EDTA(pH 8.0)1-20mM，优选的，Tris(pH8.0)5-20mM，EDTA(pH 8.0)1-10mM。