[发明专利]脂蛋白复合物及其制备和用途

权利要求书

1.脂蛋白复合物的群体，其各自包含脂质部分和载脂蛋白部分，所述载脂蛋白部分包含载脂蛋白A-I (“ApoA-I”)，其中根据经凝胶渗透色谱法的单峰所反映，所述脂蛋白复合物为至少95%均质的，其中所述脂蛋白复合物的群体通过以下方法产生，所述方法包括：

(a)将包含脂质成分和蛋白成分的起始混悬液从第一温度范围内的温度冷却至第二温度范围内的温度，其中：

(i)所述起始混悬液中的脂质:蛋白摩尔比为2:1至200:1；

(ii)所述起始混悬液中的脂质包含重量：重量比为99:1至95:5的中性磷脂和带负电荷的磷脂；

(iii)其中所述中性磷脂和带负电荷的磷脂的酰基链的长度为14-20个碳；和

(iv)所述第一温度范围包括不低于所述蛋白成分的相转变温度5℃至不高于所述蛋白成分的相转变温度5℃的温度，并且所述第二温度范围包括不低于所述脂质成分的相转变温度5℃至不高于所述脂质成分的相转变温度5℃的温度；

(b)将所述(a)的经冷却的混悬液从所述第二温度范围内的温度加热至所述第一温度范围内的温度；

(c)将所述(b)的经加热的混悬液从所述第一温度范围内的温度冷却至所述第二温度范围内的温度；和

(d)重复步骤(b)和(c)，直至获得至少95%均质的脂蛋白复合物，从而形成脂蛋白复合物。

2.权利要求1所述的群体，其中所述脂质成分包含脂质颗粒，并且所述蛋白成分包含ApoA-I或ApoA-I和脂质，所述脂质的含量为以起始混悬液中的脂质总量的重量计不超过10%。

3.权利要求1或权利要求2所述的群体，其中所述脂蛋白复合物为至少97%均质，根据经凝胶渗透色谱法的单峰所反映。

4.权利要求1至3中任一项所述的群体，其中以群体中的ApoA-I的重量计至少98%是非截短的ApoA-I。

5. 权利要求1-4中任一项所述的群体，其中根据经凝胶渗透色谱法(“GPC”)或者动态光散射(“DLS”)所测量，至少95%的所述脂蛋白复合物为具有以下粒度的颗粒的形式：4 nm至15 nm、6 nm至15 nm、4 nm至12 nm、6 nm至12 nm或者8 nm至12 nm。

6. 权利要求1-5中任一项所述的群体，其中在所述群体中至少75 wt%、至少80 wt%、至少85 wt%、至少90 wt%或者至少95 wt%的ApoA-I为成熟形式。

7. 权利要求1-5中任一项所述的群体，其中在所述群体中不超过25 wt%、不超过20wt%、不超过15 wt%、不超过10 wt%或者不超过5 wt%的ApoA-I为不成熟形式。

8.权利要求1-7中任一项所述的群体，其中在所述群体中所述ApoA-I中的不超过10%、不超过5%、不超过3%、不超过2%或者不超过1%的蛋氨酸112和蛋氨酸148各自被氧化。

9.权利要求1-8中任一项所述的群体，其中在所述群体中所述ApoA-I的不超过15%、不超过10%、不超过5%、不超过4%、不超过3%、不超过2%或者不超过1%的氨基酸被脱去酰胺。

10. 权利要求1-9中任一项所述的群体，其中所述群体含有不超过1 EU内毒素/毫克ApoA-I、不超过0.5 EU内毒素/毫克ApoA-I、不超过0.3 EU内毒素/毫克ApoA-I或者不超过0.1 EU内毒素/毫克ApoA-I。

11.权利要求1-10中任一项所述的群体，其中所述群体含有不超过100皮克宿主细胞DNA/毫克ApoA-I、不超过50皮克宿主细胞DNA/毫克ApoA-I、不超过25皮克宿主细胞DNA/毫克ApoA-I、不超过10皮克宿主细胞DNA/毫克ApoA-I或者不超过5皮克宿主细胞DNA/毫克ApoA-I。