[发明专利]一株篮状菌及利用该篮状菌液体菌膜发酵生产甜菜苷的方法

权利要求书

1.一株篮状菌，其特征在于所述篮状菌的分类命名为Talaromyces sp.WLP，于2017年4月19日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2017199。

2.一种利用权利要求1所述的篮状菌液体菌膜发酵生产甜菜苷的方法，其特征在于具体过程为：将篮状菌在液体发酵培养基中通过液体培养形成菌膜后静置培养产生甜菜苷，其中液体发酵培养基由以下成分组成：马铃薯200g/L、葡萄糖15.0g/L、FeSO₄ 2.0g/L、CuSO₄0.5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L和KH₂PO₄ 1.0g/L，pH 7.0。

3.根据权利要求2所述的利用篮状菌液体菌膜发酵生产甜菜苷的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）培养基的配制

斜面培养基的配制：马铃薯200g/L、葡萄糖15.0g/L、FeSO₄ 2.0g/L、CuSO₄ 0.5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L、KH₂PO₄ 1.0g/L和琼脂20g/L，pH自然；

液体发酵培养基的配制：将200g去皮马铃薯切成小块，加水煮沸30min，用8层纱布过滤，加葡萄糖15.0g/L、FeSO₄ 2.0g/L、CuSO₄ 0.5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L和KH₂PO₄ 1.0g/L，蒸馏水补足至总体积1000mL，调节pH值至7.0；

（2）色素发酵

将篮状菌接种至斜面培养基中进行菌株活化，30℃恒温培养箱中培养3天，将活化后的斜面分生孢子用无菌水制成浓度为4×10¹⁰个/mL的分生孢子悬液，再将分生孢子悬液接入到1000mL三角瓶中，该三角瓶内装有600mL液体发酵培养基，分生孢子的接种量为5mL，将三角瓶置于恒温摇床中在32℃、150rpm的条件下培养40h，待菌丝球大量形成时，转为静置培养，1天后液体发酵培养基表面菌膜形成，此时甜菜苷开始产生，然后再静置培养6-7天；

（3）甜菜苷的制备

篮状菌液体菌膜发酵结束后，发酵液抽滤去除菌体，上清液采用旋转蒸发仪真空浓缩，温度控制在50℃以下，浓缩至原体积的一半后加入两倍浓缩液体积的体积分数为95%的乙醇，放置过夜后再用布氏漏斗真空抽滤去除生物大分子，上清液继续进行真空浓缩脱醇至半固体，而后于-20℃冷冻过夜，将结冰的色素固体置于真空冷冻干燥机中，控制真空度为50Pa，温度为-35℃，冷冻时间为18h，得到干燥好的甜菜苷粗品，再将甜菜苷粗品进行分离纯化得到甜菜苷纯品。

4.根据权利要求3所述的利用篮状菌液体菌膜发酵生产甜菜苷的方法，其特征在于：步骤（2）中所述甜菜苷的产量最高达到7.2g/L。