[发明专利]蛋白酶缺陷丝状真菌细胞及其使用方法

权利要求书

1.一种木霉属细胞，包含至少三种具有降低的或消除的活性的内源蛋白酶和编码异源多肽的重组多核苷酸，其中所述木霉属细胞至少在以下蛋白酶中具有降低或消除的活性：SEQ ID NO:118的gap1蛋白酶和至少另外两个选自SEQ ID NO:182的pep2蛋白酶和SEQ ID NO:166的slp3蛋白酶的蛋白酶，且其中所述异源多肽以比其中所述蛋白酶不具有降低的或消除的活性的对应亲本木霉属细胞中该多肽的产生水平高至少两倍的水平产生。

2.权利要求1所述的木霉属细胞，其中至少三个编码内源蛋白酶的基因各自包含消除相应蛋白酶活性的突变。

3.权利要求1或2所述的木霉属细胞，其中所述异源多肽是哺乳动物多肽。

4.权利要求3所述的木霉属细胞，其中所述哺乳动物多肽是糖基化的。

5.权利要求3所述的木霉属细胞，其中所述哺乳动物多肽选自抗体及其抗原结合片段、生长因子、干扰素、细胞因子和白介素。

6.权利要求3所述的木霉属细胞，其中所述哺乳动物多肽选自胰岛素样生长因子1(IGF1)、人生长激素(hGH)和干扰素α2b(IFNα2b)。

7.权利要求1所述的木霉属细胞，其中所述木霉属细胞进一步包含具有降低或消除的活性的ALG3。

8.权利要求1所述的木霉属细胞，其中所述木霉属细胞进一步包含编码α-1,2-甘露糖苷酶的多核苷酸。

9.权利要求1所述的木霉属细胞，进一步包含

N-乙酰葡糖胺基转移酶I催化结构域，和任选地

N-乙酰葡糖胺基转移酶II催化结构域。

10.权利要求1所述的木霉属细胞，进一步包含编码甘露糖苷酶II和/或半乳糖基转移酶的多核苷酸。

11.一种提高多肽的稳定性的方法，包括

a)提供权利要求1-10任一项的木霉属细胞，和

b)培养所述细胞以使得表达所述异源多肽，

其中所述异源多肽与其中所述蛋白酶不具有降低的或消除的活性的对应亲本木霉属细胞中产生的所述异源多肽相比表现出提高的稳定性。

12.一种制备异源多肽的方法，包括

提供权利要求1-10任一项的木霉属细胞，

培养所述细胞以使得表达所述异源多肽，和

纯化所述异源多肽。