[发明专利]远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖及其提取分离工艺

说明书

本发明提供一种远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖的提取分离工艺，包括以下步骤：1）远东疣柄牛肝菌子实体经脱脂处理得到脱脂牛肝菌子实体粉；2）脱脂牛肝菌子实体粉采用热水浸提，水提物依次经浓缩、醇沉、除蛋白、除色素、透析后，干燥得到多糖粗品；3）分别采用离子交换层析、分子筛层析纯化多糖粗品，收集洗脱液，冷冻干燥即得远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖。通过体外自由基清除能力实验，结果表明分子量342375 Da的多糖组分具有明显的抗氧化作用。本发明开发的产品安全，可将远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖广泛作为食品添加剂。

技术领域

本发明涉及食用菌中抗氧化物质及其提取工艺，具体地说，涉及远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖及其提取分离工艺。

背景技术

自由基是生物体在新陈代谢过程中产生的一种中间代谢产物，与其他活性氧(ROS)一样存在动态平衡，但在体内存在过剩时便会引起氧化损伤，并伴随一些慢性疾病的产生(Liu et al.,2016)。除此之外，自由基还能够与机体中重要的生物大分子如DNA、蛋白质、碳水化合物等发生氧化损伤反应，会降低生物代谢反应和产生相关的疾病。最有效消除ROS的方法是使用抗氧化剂。但合成的抗氧化剂会影响机体的健康。所以通过饮食来消除ROS已成为一种较为安全的方法，同时也可以减少由氧化损伤而引起的疾病。因此，抗氧化剂的研究成为了生命科学硏究的热点，在保健医学、营养学上具有重要意义。经过科学实验研究，一些来自于食物中的多糖已被证明具有强大的抗氧化活性。多糖可通过直接或间接增强SOD酶的活性来清除自由基对机体的损伤，保护生物机体的正常运行。有很多学者通过实验验证了多糖的抗氧化性及清除自由基的能力，如野生牛肝菌的粗多糖提取物对·OH和O₂·-均都表现出一定的清除效果(杜敏华等，2012)；点柄粘盖牛肝菌的粗多糖对·OH有很好的清除能力，且抗氧化性与多糖浓度呈一定的剂量效应(史振霞和吴智艳，2012)。

远东疣柄牛肝菌作为一种野生的、食用的、口感极佳的，且具有一定药用功效的珍稀野生真菌，受到大多数人们的喜爱，因此对其子实体中活性物质的研究有着重要的意义(王心诗，2015；史振霞和吴智艳，2012)。迄今为止，科学家对食用菌活性物质的研究主要集中在其多糖和多酚类化合物(Ruthes,2016)。邓百万等(2005)以多种食用野生牛肝菌为实验材料，主要研究了其营养成分的特点及功能，认为牛肝菌在食、药用领域具有较高的价值，且具有高优质的蛋白质、含量比较少的脂肪及较低的热量等优点；高锦明等在2003年以远东疣柄牛肝菌子实体为实验材料，共分离得到了13种化合物，并对这些化合物的活性成分进行体外筛选实验，结果显示筛选出的化合物对磷脂酶A₂具有一定的选择性抑制作用，且作用效果比较显著；Choi(2011)从该种中获得15种化合物，这些化合物的类型主要是麦角甾醇类、脑苷脂类、核苷类和生物碱等；杨宁宁等(2014)采用Sephadex LH-20凝胶色谱柱层析和硅胶色谱柱层析研究该种子实体的化学成分，共分离鉴定出11种化合物。

尽管现在已有对远东疣柄牛肝菌化学成分进行研究的相关报道，但该种的多糖研究还未见报道，本发明以远东疣柄牛肝菌子实体为材料，对其抗氧化多糖的提取条件和工艺进行了优化。

发明内容

本发明的目的是提供远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖及其提取分离工艺。

为了实现本发明目的，本发明的远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖的提取分离工艺，包括以下步骤：

1)远东疣柄牛肝菌子实体经脱脂处理得到脱脂牛肝菌子实体粉；

2)脱脂牛肝菌子实体粉采用热水浸提，水提物依次经浓缩、醇沉、除蛋白、除色素、透析后，干燥得到多糖粗品；

3)分别采用离子交换层析、分子筛层析纯化多糖粗品，收集洗脱液，冷冻干燥即得远东疣柄牛肝菌抗氧化多糖。

热水浸提的最佳条件为：液料比按mL:g计为33:1，提取温度为75℃，提取时间为3h。