[发明专利]一种适合观察橡胶树花器官解剖结构的切片方法

权利要求书

1.一种适合观察橡胶树花器官解剖结构的切片方法，包括如下步骤：

（1）将修切好的橡胶树雌花、雄花及花柄中1种或几种材料置于固定液中，抽出空气，固定一段时间；

（2）步骤（1）所得材料依次用磷酸缓冲液、磷酸缓冲液与OCT包埋剂的混合溶液、OCT包埋剂浸洗，然后使用OCT包埋剂进行冰冻切片的包埋；

（3）将步骤（2）所得包埋好的材料进行冰冻切片，然后粘取切片后封片观察；

其中，步骤（1）中对于含有已发育的子房的雌花，所述修切为在子房一侧隆起处切除0.1-0.3 cm×0.1-0.3 cm的表皮；

对于未开放的雄花花蕾，所述修切为在花萼一侧隆起处修切一个0.1-0.3 cm×0.1-0.3 cm的小口；

对于开放的雄花，所述修切为切除一个展开的花萼；

对于花柄，所述修切为在子房以下切长度为0.3-0.8 cm的一段花柄；

将未开放的雄花花蕾和已发育的子房侧面修切一个小口，花柄上下端平行修切，通过抽真空的方法，使得内部的气体排出，从而加速溶液的浸入和置换速度；

步骤（2）中磷酸缓冲液的浓度为0.005-0.02 M，pH为6-8；

磷酸缓冲液与OCT包埋剂的混合溶液中磷酸缓冲液和OCT包埋剂的体积比为1:0.5-2；

步骤（2）中用磷酸缓冲液浸洗的时间为15-20 min，用磷酸缓冲液和OCT包埋剂的混合溶液浸洗的时间为20 min以上，用OCT包埋剂浸洗的时间为40 min以上；

冰冻切片的包埋时冷冻台温度为-18至-22℃；包埋的时间为15-30 min。

2.根据权利要求1所述的切片方法，其特征在于，步骤（1）中所述固定液为包含多聚甲醛和戊二醛的磷酸缓冲溶液。

3.根据权利要求2所述的切片方法，其特征在于，所述多聚甲醛的质量浓度为2-6wt%，所述戊二醛的浓度为1-5wt%。

4.根据权利要求2-3任一项所述的切片方法，其特征在于，步骤（1）中磷酸缓冲溶液的pH为6-8。

5.根据权利要求1-3任一项所述的切片方法，其特征在于，步骤（1）中所述固定液为包含4 wt%多聚甲醛和2.5 wt%戊二醛的0.01 M的pH 7.2磷酸缓冲液。

6.根据权利要求1-3任一项所述的切片方法，其特征在于，步骤（1）中固定的时间为2-4h。

7.根据权利要求1-3任一项所述的切片方法，其特征在于，步骤（3）中封片使用10 wt%的甘油水溶液。