[发明专利]一种检测CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器及其制备方法与应用有效
| 申请号： | 201710513885.9 | 申请日： | 2017-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN107356646B | 公开（公告）日： | 2019-05-31 |
| 发明（设计）人： | 沈艳飞;张明明;潘登;陈慧琴;张袁健 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | G01N27/327 | 分类号： | G01N27/327;G01N27/26 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 210096*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 cp4 epsps 蛋白 电化学 免疫 传感器 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种检测CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，基底电极表面依次经AuNPs-CMK-3分散液修饰，EDC和NHS的混合溶液活化，CP4-EPSPS纳米抗体和硫堇的混合溶液共价结合。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述基底电极为玻碳电极。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述AuNPs-CMK-3分散液按如下步骤制备得到：
（1）取HAuCl4溶液在冷凝回流装置中加热煮沸，在搅拌条件下向其中加入柠檬酸钠溶液作为还原剂，继续搅拌加热10～30 min后，撤去加热源冷却至室温，得到AuNPs溶液；
（2）称取CMK-3加入步骤（1）得到的AuNPs溶液中，室温下搅拌反应4～6 h后，将得到的混悬液真空抽滤，收集得到的AuNPs-CMK-3进行干燥；将干燥的AuNPs-CMK-3溶于DMF中，得到AuNPs-CMK-3分散液。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中HAuCl4和柠檬酸钠的质量比为1:2.375。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中HAuCl4和步骤（2）中CMK-3的质量比为1～4：5。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述CP4-EPSPS抗体为CP4-EPSPS纳米抗体。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）滴加AuNPs-CMK-3分散液于经过处理的基底电极表面，室温下放置12～24 h，用去离子水清洗，晾干；
（2）滴加EDC和NHS的混合溶液于步骤（1）得到的电极表面，室温放置1～2 h，用去离子水清洗，晾干；
（3）滴加CP4-EPSPS抗体和硫堇的混合溶液于步骤（2）得到的电极表面，2～4 ℃放置10～12 h，用去离子水清洗，晾干；
（4）滴加BSA溶液于步骤（3）得到的电极表面，室温放置10～40 min。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）EDC和NHS的混合溶液中，EDC与NHS的质量比为2:1。
9.权利要求1-8任意一项所述的制备方法制备得到的电化学免疫传感器。
10.权利要求9所述的电化学免疫传感器在定量检测CP4-EPSPS蛋白中的应用。
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