[发明专利]一种用DSC作为活化剂的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述制备方法中细菌多糖与蛋白共价结合前，细菌多糖首先与N,N’-二琥珀酰亚胺碳酸酯(DSC)在pH为8.0-9.5碱性水溶液条件下进行活化反应，形成细菌多糖的琥珀酰亚胺碳酸酯。

2.如权利要求1所述的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述细菌多糖与N,N’-二琥珀酰亚胺碳酸酯(DSC)的质量比为1：1-1：3。

3.如权利要求1所述的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述活化反应中细菌多糖以1-20mg/mL的浓度溶解于0.1～0.3mol/L的NaCl溶液中。

4.如权利要求1所述的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述细菌多糖为b型流感嗜血杆菌多糖，奈瑟氏脑膜炎球菌血清群A群、肺炎球菌血清型1、2、4、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F，副伤寒沙门菌甲型和副伤寒沙门菌乙型中的任意一种。

5.如权利要求1～4任一所述的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述细菌多糖的琥珀酰亚胺碳酸酯与双功能链接剂反应形成细菌多糖衍生物，细菌多糖衍生物再与载体蛋白在缩合剂的作用下共价结合，形成细菌多糖蛋白结合物。

6.如权利要求5所述的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述双功能链接剂为1,6-己二酰肼(ADH)。

7.如权利要求5所述的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述载体蛋白为破伤风类毒素(TT)、白喉毒素(DT)和白喉毒素无毒变异体(CRM197)中的任意一种。

8.如权利要求5所述的细菌多糖蛋白结合疫苗的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤(1)细菌多糖与N,N’-二琥珀酰亚胺碳酸酯(DSC)在pH为8.0-9.5碱性水溶液条件下进行活化反应，形成细菌多糖的琥珀酰亚胺碳酸酯；

步骤(2)在pH为8.0-9.5碱性水溶液条件下，加入双功能链接剂与细菌多糖琥珀酰亚胺碳酸酯进行单端共价连接，得到细菌多糖衍生物；

步骤(3)细菌多糖衍生物经1-30KD的膜超滤浓缩至多糖浓度为1-15mg/mL，得到超滤浓缩后的细菌多糖衍生物；

步骤(4)将超滤浓缩后的细菌多糖衍生物中加入载体蛋白，并在缩合剂作用下反应，形成细菌多糖蛋白结合物，超滤浓缩后的细菌多糖衍生物质量与载体蛋白的质量比为1：0.6-1：2；

步骤(5)用凝胶柱进行纯化，收集V₀附近的吸收峰，除菌过滤即获得纯化后的细菌多糖蛋白结合物原液，即为细菌多糖蛋白结合疫苗。

9.一种细菌多糖蛋白疫苗，其特征在于，所述疫苗采用6～8任一所述的制备方法得到的。

10.N,N’-二琥珀酰亚胺碳酸酯在活化细菌多糖中的应用。