[发明专利]封闭式畜禽舍内环境微生物气溶胶监测方法

权利要求书

1.一种封闭式畜禽舍内环境微生物气溶胶监测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、采样点布设：畜禽舍内按照四等分对角线选点法进行布点，取样点设置至少5个点；

步骤二、在畜禽舍内通过空气微生物气溶胶采样装置对采样点进行连续采样，利用宏基因组技术分析微生物种类及含量，结合生物信息学，获取优势菌、致病菌及潜在致病菌信息；其中连续采样过程包括对进行饲料投放、吃料高峰期、畜禽休息、畜禽自由活动、畜禽舍清扫、垫料更换行为时的采样；

所述四等分对角线选点法是指以畜禽舍中心为起点，从起点到畜禽舍四个拐角的方向选择等分采样点，并以等分采样点和畜禽舍中心点组成5个采样点；

所述取样点的高度的选择为：对于网床或笼养鸡舍中的畜禽为猪和肉鸡时，取样选择三层取样，高度分别为0.2m、0.4m和0.6m，畜禽为笼养蛋鸡时，取样选择三层取样，高度分别为0.8m、1m和1.2m；对于地面养殖舍中的畜禽为鸡鸭时，取样选择三层取样，高度分别为0.1m、0.3m和0.4m，畜禽为牛羊时，取样选择五层取样，高度分别为0.8m、1m、1.2m、1.4m和1.6m；

所述空气微生物气溶胶采样装置为电磁激励磁珠旋转型微生物气溶胶采集富集仪或液体撞击式空气微生物采样器；

在空气微生物气溶胶采样装置中注入采样液，连接抽气装置，收集空气中的微生物气溶胶，采样液因气流冲击而搅动形成漩涡，从而将微生物粒子释放并均匀分布于采样液中，并能够进一步检测出空气中活性微生物的数量；

所述采样液包括以下成分：0.02～0.04mol/L的磷酸盐缓冲液100～120体积份、十二烷基二乙醇酰胺10～20重量份、改性菊粉5～10重量份、卡拉胶1～5份、椰油酰胺丙基甜菜碱1～5体积份、十二水合磷酸氢二钠1～5份、丙酮酸钠1～3份、乙二胺四乙酸二钠5～10重量份、二甲基亚砜20～30体积份、去离子水200～250体积份；

所述采样液的制备方法为：取磷酸盐缓冲液、十二烷基二乙醇酰胺、改性菊粉、卡拉胶、椰油酰胺丙基甜菜碱、十二水合磷酸氢二钠、丙酮酸钠、乙二胺四乙酸二钠、二甲基亚砜、去离子水，搅拌混合，得到混合液，将混合液加入恒温槽中，选用探头式脉冲超声波仪器对混合液进行超声处理，得到采样液；所述探头式脉冲超声波仪器的探头插入混合液下5～10cm，混合液的液面高度保持12～15cm，脉冲时间为15～20s，占空比为60％～85％，恒温槽中控制温度为25℃，声强为100～500W/cm²，超声频率25～45kHz，处理时间为1～3h；所述探头的直径为20mm；

在超声处理过程中，向混合液中通入气体氮气；所述氮气的流速为80-120mL/min；

所述改性菊粉的制备方法为：按重量份，取10～20份菊粉和50～80份碱性溶液置于带搅拌的密封容器中，向其中通入氮气使料液中氮气饱和，然后将该密封容器置于1.5MeV、30mA的电子加速器中进行辐照搅拌处理，然后过滤，制得改性菊粉；所述辐照采用的辐照剂量率为200～500kGy/h，辐照剂量为500～2000kGy，搅拌速度为100～200r/min；所述碱性溶液的配制方法为：按重量份，100份水中加入10～20份重量比为2:1的尿素和氢氧化钠。