[发明专利]一种用于鸡滑液囊支原体高密度培养的培养基及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于鸡滑液囊支原体高密度培养的培养基，属于生物技术领域，包括批培养基和补料培养基，批培养基包含下列组分：PPLO肉汤、水解乳蛋白、酵母浸出粉、烟酰胺、精氨酸、酚红和猪血清；批培养基用NaOH溶液调pH值；补料培养基包含有下列组分：酵母浸出粉和葡萄糖；该培养基的制备方法包括如下步骤：培养发酵罐接种用种子培养基、批培养基批培养阶段、补料培养基补料阶段和菌液活菌量测定。本发明的培养基在不影响目的菌体生物学特性情况下，能显著提高鸡滑液囊支原体的培养密度，可减少试剂的消耗，节约成本。

技术领域

本发明涉及一种培养基及其制备方法，特别是涉及一种用于鸡滑液囊支原体高密度培养的培养基及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术

鸡滑液囊支原体是禽支原体中最重要的致病性菌之一，可感染鸡与火鸡，主要引起关节渗出性的滑液囊膜炎及腱鞘滑膜炎，具有很强的传染性，且常与细菌或病毒混合感染致病，对养鸡业造成了巨大的经济损失，防治MS主要采用药物治疗和免疫接种，但是药物治疗容易使鸡滑液囊支原体产生耐药性，因此疫苗免疫是控制该病更为有效的措施。

鸡滑液囊支原体灭活疫苗的制备中，首要环节就是鸡滑液囊支原体的培养，为了获得理想的鸡滑液囊支原体培养菌浓度，有必要开发出一种适用于用于鸡滑液囊支原体高密度培养的培养基。

发明内容

本发明的主要目的是为了提供一种用于鸡滑液囊支原体高密度培养的培养基及其制备方法，用于提高鸡滑液囊支原体的培养密度，减少试剂的消耗，节约成本。

本发明的目的可以通过采用如下技术方案达到：

一种用于鸡滑液囊支原体高密度培养的培养基，包括批培养基和补料培养基，所述批培养基在补料发酵阶段添加所述补料培养基；

所述批培养基包含下列组分：PPLO肉汤、水解乳蛋白、酵母浸出粉、烟酰胺、精氨酸、酚红和猪血清；

所述批培养基用NaOH溶液调pH值；

所述补料培养基包含有下列组分：酵母浸出粉和葡萄糖。

进一步的，每升所述批培养基包含下列配比组分：

PPLO肉汤：20.0～25.5g；

水解乳蛋白：5～8g；

酵母浸出粉：3～7g；

烟酰胺：0.3g；

精氨酸：2g；

酚红：0.008g；

猪血清：200ml；

所述批培养基用20％NaOH调pH值至7.6～7.8。

进一步的，每升所述补料培养基包含有下列配比组分：

酵母浸出粉：3～7g/L；

葡萄糖：5g/L。

进一步的，所述批培养基是在分批发酵模式下单独用于鸡滑液囊支原体发酵培养的培养基。

进一步的，所述批培养基是在补料分批发酵模式下，与所述补料培养基联用，用于鸡滑液囊支原体发酵培养的培养基。

一种用于鸡滑液囊支原体高密度培养的培养基的制备方法，采用fed-batch补料培养发酵模式，先采用发酵罐配制批培养基，发酵罐原位灭菌，再配制补料培养基，灭菌；所述制备方法具体包括如下步骤：

步骤1：培养发酵罐接种用种子培养基

采用所述批培养基，用冻存菌种接种，培养后调PH值，获得一级种子液，再将一级种子液接种传代一次获得二级种子液，将二级种子接种到发酵罐的发酵培养基中，进行批培养；