[发明专利]一种可视化基因芯片检测肺部感染病原菌的方法

权利要求书

1.一种可视化基因芯片检测肺部感染病原菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1基于临床的肺部感染病原菌谱确定；

S2根据细菌的特定基因做检测靶点；

S3设计通用引物和探针；

S4芯片制备；

S5靶基因扩增；

S6芯片杂交、洗涤；

S7基因芯片可视化检测；

S8优化条件，建立方法；

S9临床验证；

S10与细菌培养进行比对；和

S11建立肺部感染病原菌可视化基因芯片检测。

2.根据权利要求1所述的可视化基因芯片检测肺部感染病原菌的方法，其特征在于，步骤S2和S3中，以取筛查的10种细菌为检测靶点，采用计算机Clustal×1.8 msw Alignment软件对多种细菌的靶基因进行序列比对，采用Primer 5.0软件设计特异性引物与探针，并进行Blast分析筛选，筛选通用性引物和多种呼吸道致病菌特异性检测探针，所有下游引物在5′端进行生物素标记，全部寡核苷酸探针在3′端进行氨基修饰。

3.根据权利要求1所述的可视化基因芯片检测肺部感染病原菌的方法，其特征在于，步骤S4中，成引物、探针，将探针用点样液稀释至终浓度后，各取20ul置于384孔板，用点样仪将探针点到空白的醛基化修饰玻片上，于室温放置至少18h，每张芯片10个区，每个区为7×7 探针矩阵。

4.根据权利要求1所述的可视化基因芯片检测肺部感染病原菌的方法，其特征在于，步骤S7中，依次点加链霉亲和素标记的辣根过氧化物酶、生物素－标记的酪胺和链霉亲和素－纳米金孵育，最后加入银增强试剂显色，观测结果。