[发明专利]一种利用芽孢杆菌高效分泌表达外源蛋白的方法在审
| 申请号： | 201710522101.9 | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN107287229A | 公开（公告）日： | 2017-10-24 |
| 发明（设计）人： | 任钧;唐旭;雷蕾;樊超;柴进凯;曹付明;范佳;曹镜 | 申请（专利权）人： | 成都美溢德生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;C12R1/125;C12R1/07;C12R1/10 |
| 代理公司： | 成都九鼎天元知识产权代理有限公司51214 | 代理人： | 易小艺 |
| 地址： | 610222 四川省*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 芽孢 杆菌 高效 分泌 表达 蛋白 方法 | ||
1.一种利用芽孢杆菌高效分泌表达外源蛋白的方法，其特征在于：所述目的蛋白在胞内大量积累，其就被大量分泌到发酵液中。
2.根据权利要求1所述的一种利用芽孢杆菌高效分泌表达外源蛋白的方法，其特征在于：所述目的蛋白在胞内表达量超过总蛋白的2%以上时，其将会被分泌到发酵液中，分泌量占表达蛋白的50%以上。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用芽孢杆菌高效分泌表达外源蛋白的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
（1）构建缺失八个蛋白酶的芽孢杆菌菌株：敲除芽孢杆菌表达菌株的aprE、bpr、epr、mpr、nprB、nprE、wprA和vpr八个蛋白酶基因，避免目的蛋白分泌到发酵液中后，被枯草芽孢表达菌株分泌的蛋白酶降解掉；
（2）克隆目的蛋白基因，根据表达系统的要求构建表达载体，并将表达载体转入缺失八个蛋白酶的芽孢杆菌菌株，获得表达目的蛋白的表达菌株；
（3）对步骤（2）中的表达菌株进行诱导培养，即得分泌的目的蛋白。
4.根据权利要求3所述的一种利用芽孢杆菌高效分泌表达外源蛋白的方法，其特征在于：所述表达系统为使目的蛋白在胞内积累被大量分泌到发酵液中的表达系统。
5.根据权利要求1所述的一种利用芽孢杆菌高效分泌表达外源蛋白的方法，其特征在于：所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌168、Z12菌株、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和其它芽孢杆菌；所述枯草芽孢杆菌Z12，拉丁文Bacillus subtilis Z12，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 CGMCC，保藏号为12750。
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