[发明专利]一种基于磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒的尿酸酶生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种基于磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒的尿酸酶生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将玻碳电极在麂皮上用0.5μm的氧化铝抛光粉粗磨后，用超纯水清洗干净，再用0.35μm的氧化铝抛光粉细磨，用超纯水清洗干净，置于体积比为1：3的硝酸/乙醇混合液和蒸馏水中各超声清洗3～5min，用超纯水洗净晾干，得到预处理的玻碳电极；

2)将步骤1)中得到的预处理的玻碳电极作为工作电极，在浓度为0.5mol/L的H₂SO₄溶液中进行循环伏安扫描，扫描范围为-1.0～1.0V，扫描速率为50mv/s，扫描段数为20段，直至循环伏安扫描曲线稳定，若循环伏安图中峰电位差在80mv以下，则完成电极活化，否则将电极在浓度为0.2mol/L的KNO₃中记录K₃Fe[(CN)₆]溶液的循环伏安曲线，扫描速度50mv/s，扫描范围-0.1v～0.6v直至稳定，得到活化的玻碳电极；

3)在带有冷凝装置的250mL的圆底烧瓶中加入质量百分比为0.01％的氯金酸水溶液100mL加热至沸腾，剧烈搅动下精确加入质量百分比1％的柠檬酸三钠水溶液0.3～3mL，氯金酸水溶液在1～3min内由金黄色变为紫红色，继续煮沸10～20min，冷却后以蒸馏水恢复到原体积，制得在可见光区最高吸收峰为220～525nm的纳米金溶胶；

4)以Na₂HPO₄和CaCl₂为原料，在10℃～25℃条件下预冷1～2h后混合并搅拌均匀，然后加入由步骤3)得到的纳米金溶胶和氧化石墨烯悬浊液各3～10mL，调节pH至3～5，并搅拌均匀，在10～25℃放置1～2h后，在100～160℃下水热反应10～14h，抽滤洗涤后烘干，得到磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒混合物；

5)以步骤2)中得到的活化的玻碳电极为工作电极，将步骤4)中制得的磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒混合物滴涂在活化的玻碳电极表面，晾干再滴涂再晾干直至复合材料在工作电极达到饱和，用超纯水冲洗干净晾干，得到具有磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒混合物膜的基体电极；

6)向5mL的样品管中依次加入10μL质量百分比浓度为2％的戊二醛水溶液、50μL pH值为7.0的PBS溶液和5mg尿酸酶，用Nafion溶液定容至500μL，混合，摇匀，得到尿酸酶混合液；

7)在步骤5)中得到的具有磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒的基体电极的表面滴涂20μL步骤6)中得到的尿酸酶混合液，晾干，待玻碳工作电极表面形成尿酸酶膜，即得到基于磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒的尿酸酶生物传感器。

2.根据权利要求1所述的一种基于磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒的尿酸酶生物传感器的制备方法，其特征在于：所述PBS溶液为0.1mol/L的NaH₂PO₄-Na₂HPO₄溶液。

3.根据权利要求1所述的一种基于磷酸氢钙-还原石墨烯/纳米金颗粒的尿酸酶生物传感器的制备方法，其特征在于：所述Nafion溶液为全氟化高分子聚合物磺酸盐阳离子交换剂。