[发明专利]酵素产品中花青素的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明属于花青素检测技术领域，具体涉及酵素产品中花青素的快速检测方法。

背景技术

酵素产品是以植物性材料为原料，经过微生物发酵，含有活性成分的一类产品，目前市场上按照原料分类可以分为多种酵素产品，而每一种酵素产品含有其特殊的活性成分，其中花青素就属于其中一类，那么对花青素的定量检测技术就成为关键的部分。

目前花青素的测定方法有可见分光光度法、HPLC分析法、盐酸/香草醛法。对于葡萄中的花青素的测定方法，传统的分光光度法是KMnO4分光光度计法，该方法基于花青素结构中含有还原性基因，能够在强酸性介质中与KMnO4发生氧化还原反应，在545nm吸光度值减少而在310nm处吸光度值增加，通过A310/A545的比值来测定花青素。采用高效液相的方式进行检测，但其检测时间长，比较适用于成品状态。对于酵素生产过程中的花青素含量检测并不适用。

发明内容

本发明提出一种酵素产品中花青素的快速检测方法，该方法能够快速测得酵素生产过程中的花青素，结果比较准确。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种酵素产品中花青素的快速检测方法，包括以下步骤：

1)标准曲线制备：称取花青素的标准品溶于水中制备得到花青素溶液，用碱性溶液滴定花青素溶液至pH为9.2±0.01，再吸取调节好pH的花青素溶液配制成不同浓度梯度的稀释液，以纯水作为对照，在270～280nm范围内测吸光值，计算得到标准曲线及相应的回归方程；

2)样品测定：取待测酵素样品，用纯水进行稀释得到吸收后的酵素溶液，用碱性溶液滴定酵素溶液的pH为9.2±0.01，以纯水作为对照，测定在270～280nm范围内测吸光值，将测得的吸光值带入回归方程中计算结果并乘以稀释倍数即可。

优选地，所述步骤1)与步骤2)的碱性溶液均为氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液。

本发明的有益效果：

本发明快速检测方法利用花青素pH为9.2±0.01溶液中，在270～280nm范围内有特定的吸收峰，可以很快准确获知待测样品中的花青素浓度。

具体实施方式

一种酵素产品中花青素的快速检测方法：

1)标准曲线制备：

称取花青素标准品2.5g溶于50mL水中，用1mol/L的氢氧化钠溶液滴定至pH＝9.2±0.01，吸取该溶液0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL置于10mL棕色容量瓶中(最终浓度分别为0.5、1.25、2.5、5、7.5mg/mL)，加水至刻度，摇匀，即得花青素工作液。各取2mL，以纯水为对照，于270～280nm范围内测吸光值，以花青素和吸光值为坐标轴绘制标准曲线，求得回归方程为Y＝18.866X-7.6676R2＝0.9961，Y-花青素浓度，X-吸光值。

2)样品测定

选择蓝莓酵素作为待测样品，量取50mL待测样品，边搅拌边滴定，用1mol/L的氢氧化钠溶液滴定至pH＝9.2±0.01，取2ml样品，以纯水为对照，于270～280nm范围内测吸光值为0.82，将测得的吸光值代入到回归方程中计算结果，并乘以稀释倍数得到最终结果为7.82mg/ml,相对标准偏差5％，回收率86％检测用时30分钟。

对照实验：

选取同一蓝莓酵素样品，参考采用《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中保健食品中原花青素测定的方法，测得样品含量8.34mg/ml,相对标准偏差7％，回收率95％，检测用时150分钟。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。