[发明专利]一种MDA‑MB‑231乳腺癌细胞扩大培养的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，具体地，涉及一种MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的癌症，主要包括导管癌和小叶癌。2016年美国CA（A Cancer Journal for Clinicians）公布的最新统计数据显示，美国2016年预计将有420840例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤的38%，居女性恶性肿瘤发病率第一位，并且死亡人数将达52930例。更为严重的是全球的乳腺癌发病率正在逐年增长。

细胞培养是生物与健康相关研究领域的一项重要技术。随着生命科学的迅速发展，目前细胞培养已成为细胞生物学、分子生物学、遗传学和免疫学等学科研究的重要基础。为了深入探讨细胞的生长活动规律、有关疾病的病理和药物的药理（毒理）机制，开发具有不同针对性的细胞培养方法具有重要意义。其中，MDA-MB-231乳腺癌细胞作为人源性高转移乳腺癌细胞，常用于乳腺癌的体内外研究。

发明内容

发明目的：本发明提供了一种MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，用于多种人源以及非人源细胞的培养。

技术方案：本发明提供了一种MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，包括以下步骤：用移液枪将MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基吸尽，加入3-5ml PBS洗涤细胞2-3次，向细胞培养皿中加入1-2ml 0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化3-5min，加入2-3ml的新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底40-50次；将液体移至细胞离心管中，在1000-1500g/min条件下离心3-10min，用移液枪去除上清液，加入2-3ml新鲜的MDA-MB-231乳腺癌细胞专用培养基，使用移液枪上下吹打细胞40-50次；平均加入到3-8个细胞培养皿中，进行扩大培养。本发明所述的MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，方法合理，易于实现，细胞生长速度快，细胞状态好，边界清晰，镜下观察透亮、分裂相更多、形态及分散度佳，可以方便应用于乳腺癌的体内外研究。

进一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述胰蛋白酶中还包含0.01%的EDTA。可以与胰蛋白酶相配合，迅速使贴壁细胞脱离培养皿，减少胰蛋白酶对细胞的损伤。

进一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述MDA-MB-231乳腺癌细胞专用包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。胎牛血清可以进一步为培养的细胞提供营养物质，同时还能终止胰蛋白酶的消化作用。

进一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80-90份、碳酸氢钠 10-20份、丙酮酸钠8-18份、脂肪酸白蛋白4-16份、氯化钾 30-50份、无水硫酸镁 5-12份、氯化钠60-80份、无水磷酸二氢钠 8-16份、叶酸 0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、烟酰胺0.2-0.8份、无水氯化钙20-40份、硝酸铁0.1-0.5份、丁二酸 5-10份、丁二酸钠9-18份、D-泛酸钙 0.2-0.8份、N-异丙基甲基丙烯酰胺0.2-0.8份、酒石酸胆碱0.5-1份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.1-0.5份、盐酸吡哆辛 0.1-0.6份、L-丙酰胺-L-谷氨二肽0.2-1份、乙酸酯1-3份、生物素0.5-0.8份、硫辛酸0.2-0.8份、酚红钠0.8-1.5份和去离子水100份。

进一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。

进一步的，上述的MDA-MB-231乳腺癌细胞扩大培养的方法，所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：胰岛素生长因子3-8份、白介素6 2-5份、白介素10 1-4份、白介素12 3-6份、TNF-β2-10份、GM-CSF1-5份。基础培养基组分合理，营养丰富，可以为细胞培养提供更多的营养物。