[发明专利]一种猪肝细胞的原代培养方法在审
| 申请号： | 201710525598.X | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN107151651A | 公开（公告）日： | 2017-09-12 |
| 发明（设计）人： | 郭荣富;李美荃;张春勇;陈克嶙;安清聪 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 昆明盛鼎宏图知识产权代理事务所(特殊普通合伙)53203 | 代理人： | 许竞雄 |
| 地址： | 650000*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 猪肝 细胞 培养 方法 | ||
1.一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于：包括依次进行的肝脏的获取、肝脏组织压块、肝细胞培养、原代细胞鉴定，其中，所述肝脏组织压块是将肝脏置于灭菌培养皿中，剪碎后放置在30～60目网筛中碾压，收集滤过的肝脏组织压块于灭菌容器中。
2.根据权利要求1所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，所述肝脏来源于新生仔猪，所述新生仔猪的猪龄小于5h。
3.根据权利要求1所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，所述肝脏的获取是将新生仔猪浸泡于酒精中消毒后，颈部处死，移至超净工作台，取出肝脏，剥除纤维成分，所述纤维成分包括被膜和血管。
4.根据权利要求3所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，所述酒精为体积分数75%的酒精，消毒时间为20s。
5.根据权利要求1所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，碾压肝脏时不断用含血清DMEM冲洗后离心，得到肝脏组织压块。
6.根据权利要求1所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，所述肝细胞培养中使用的培养液为高糖型DMEM培养液，其中还含有质量分数为10%胎牛血清和1%双抗培养基。
7.根据权利要求6所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，将所述含肝脏组织块的培养液置于CO2培养箱中培养。
8.根据权利要求7所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，从取出肝脏至将含肝脏组织块的培养液置于CO2培养箱中所经过的时间小于90min。
9.根据权利要求1所述的一种猪肝细胞的原代培养方法，其特征在于，培养的细胞为猪原代肝细胞。
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