[发明专利]一种高营养细胞扩大培养的方法

权利要求书

1.一种高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：包括以下步骤：用移液枪将培养基吸尽，加入3-5ml PBS洗涤细胞2-3次，向细胞培养皿中加入1-2ml 0.38%的胰蛋白酶，于37℃条件下消化3-5min，加入2-3ml的新鲜培养基，使用移液枪吹打细胞培养皿底40-50次；将液体移至细胞离心管中，在1000-1500g/min条件下离心3-10min，用移液枪去除上清液，加入2-3ml新鲜培养基，使用移液枪上下吹打细胞40-50次；平均加入到3-8个细胞培养皿中，进行扩大培养。

2.根据权利要求1所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述胰蛋白酶中还包含0.01%的EDTA。

3.根据权利要求1或2所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述培养基包括70-90%的基础培养基以及10-30%的胎牛血清。

4.根据权利要求3所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述基础培养基以重量组分计，包括以下组分：葡萄糖 80-90份、碳酸氢钠10-20份、丙酮酸钠8-18份、丝胶蛋白3-12份、氯化钾 30-50份、无水硫酸镁 5-12份、氯化钠60-80份、无水磷酸二氢钠 8-16份、叶酸 0.2-0.6份、肌醇0.5-1.5份、烟酰胺0.2-0.8份、无水氯化钙20-40份、硝酸铁0.1-0.5份、丁二酸 5-10份、丁二酸钠9-18份、D-泛酸钙 0.2-0.8份、酒石酸胆碱0.5-1份、核黄素0.1-0.3份、盐酸硫胺0.1-0.5份、盐酸吡哆辛 0.1-0.6份、N-异丙基丙烯酰胺0.1-0.5份、亚麻酸0.3-3份、乙醇胺0.5-0.8份、芳香酸酯0.2-0.9份、酚红钠0.8-1.5份和去离子水100份。

5.根据权利要求4所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述基础培养基还包括3-8份氨基酸，所述氨基酸以重量组分计，由以下组分组成：L-盐酸精氨酸 5-10份、L-盐酸胱氨酸 3-8份、L-丝氨酸3-6份、甘氨酸1-5份、L-盐酸组氨酸 4-6份、L-异亮氨酸8-20份、L-亮氨酸7-18份、L-盐酸赖氨酸10-20份、L-甲硫氨酸1-6份、L-苯丙氨酸2-8份、L-苏氨酸5-15份、L-色氨酸1-3份、L-酪氨酸5-9份和L-缬氨酸8-12份。

6.根据权利要求5所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述基础培养基还包括2-5份辅助因子，所述辅助因子以重量组分计，由以下组分组成：重组人碱性成纤维细胞生长因子2-10份、白介素2 3-8份、白介素4 3-6份、白介素14 1-5份、IFN-γ3-6份和神经白细胞素1-4份。

7.根据权利要求6所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述基础培养基以重量组分计，还包括0.006份青霉素和0.01份的链霉素。

8.根据权利要求7所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述青霉素选自10000U/ml，所述链霉素选自10000μg/ml。

9.根据权利要求1所述的高营养细胞扩大培养的方法，其特征在于：所述细胞培养皿为10cm细胞培养皿。