[发明专利]一种片段法合成西曲瑞克的方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种片段法合成西曲瑞克的方法。

背景研究

西曲瑞克，英文商品名又为Cetrorelix，是一种直链线性十肽，其分子结构式如下：

氨基酸序列如下：

Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser-Tyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH₂

分子式：C₇₀H₉₂N₁₇O₁₄Cl

分子量：1431.04

CAS：120287-85-6

西曲瑞克(Cetrorelix)，又名醋酸西曲瑞克，早在1999年8月瑞士Ares-Serono公司便完成了西曲瑞克在德国的首次上市。其作为是一种黄体酮释放激素抑制素(LH-RH)受体阻断剂，其能够有效控制卵巢所受到的刺激，阻止不成熟卵泡提前排除，从而有助于受孕。

西曲瑞克作为一种肿瘤治疗药物，具有抵抗促性腺激素释放激素(GnRH)的作用，能有效的抑制垂体分泌卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)，从而能有效的抑制肿瘤的生长或者有效的预防、缓解及治疗其他疾病，特别对于前列腺癌、子宫纤维癌以及卵巢癌等相关癌症，并且西曲瑞克可以与癌细胞膜的LHRH受体相结合，从而抑制癌细胞的转移及增殖。此外，西曲瑞克能够有效的诱导卵巢癌细胞的凋亡。并且相关研究证实西曲瑞克还对于子宫内膜异位、卵巢过度刺激综合征以及良性前列腺肥大等疾病具有较好的预防、改善及治疗效果。

西曲瑞克的合成基本分为固相合成及液相合成两种，由于西曲瑞克中含有例如D-2-Nal、D-Phe(4Cl)、D-3Pal以及D-Cit四种特殊氨基酸，液相缩合非常困难，其中D-2-Nal、D-Phe(4Cl)与D-3Pal相连，缩合难度更大，且每一步纯化困难，因此不适合采用液相合成方法。

固相合成通常采用Boc法和Fmoc法。专利CN101863960A采用Boc保护固相合成法，虽然有效避免了HF的使用；但是采用体积比为1～1.6:1的TFA/DCM溶液脱保护时，会造成树脂上的肽被切除，降低粗肽收率；通过H₂与Pd进行脱保护反应24h，反应时间长，粗肽收率仅为60～70％，而H₂使用较为危险，Pd金属除尽难度大，对设备要求高。

专利CN101284863A采用Fmoc保护固相合成法，虽然采用最小保护原则，但是最后脱保护，对整条链段进行乙酰化，将导致D-Cit的侧链脲基发生乙酰化，从而产生毒性[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克工艺杂质，其结构如下：Ac-D-2Nal-D-Phe(4Cl)-D-3Pal-Ser-Tyr-D-Cit(Ac)-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH₂；这将严重影响西曲瑞克的使用安全，因此不利于大规模工业生产；并且偶联反应温度在30-50摄氏度，很容易产生消旋肽杂质，从而影响最终产品的光学纯度。

专利CN104086632A公开了一种使用Fmoc-D-Orn(Dde)-OH代替侧基无保护的Fmoc-Cit-OH的固相合成法,虽然此合成方法可以控制毒性[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克杂质含量在0.1％以下，但是合成过程中采用毒性水合肼试剂脱除Dde保护，并且Fmoc-D-Orn(Dde)-OH价格昂贵，且工艺复杂。

专利CN104892732A固相合成中其末端氨基酸偶联时采取Ac-D-2Nal-OH，酸解切割肽树脂后使用乙醚进行沉淀，虽然其有效的避免了[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克毒性杂质的产生，但是合成中其采用Fmoc-D-Cit-OH作为原料,侧链未保护，后续反应操作步骤多，易发生副反应，引起收率低，纯度不高，纯化难度大。

上述专利技术方案的固相合成中使用氨水、H₂、Pd或者水合肼等危险有毒试剂，所用保护氨基酸原料较为昂贵，成本高，合成工艺繁琐，不能完全的避免[D-Cit(Ac)]-西曲瑞克毒性杂质的生成，粗肽的产率及纯度较低，为纯化带来较大困难，不利于醋酸西曲瑞克进行规模放大生产。因此，本发明人对西曲瑞克的合成方法进行了研究，从而得到本发明的技术方案。

发明内容

为解决上述指出的技术问题，本发明提供一种片段法合成西曲瑞克的方法，方案如下：

一种片段法合成西曲瑞克的方法，该方法具体步骤如下：