[发明专利]一种LAMP防污染的方法在审
| 申请号： | 201710530484.4 | 申请日： | 2017-06-30 |
| 公开（公告）号： | CN109207563A | 公开（公告）日： | 2019-01-15 |
| 发明（设计）人： | 马翠萍;王富鑫;石超;井豪;韩灵芝;张美玲 | 申请（专利权）人： | 青岛科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 青岛中天汇智知识产权代理有限公司 37241 | 代理人： | 刘晓娟;万桂斌 |
| 地址： | 266000 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 限制性核酸内切酶 混合物 防污染 内引物 切割 混合物孵育 避免污染 高温条件 扩增产物 污染产物 消除反应 反应管 聚合酶 外引物 靶标 孵育 扩增 灭活 引物 污染物 杂交 污染 | ||
1.一种LAMP防污染的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
(1)设计LAMP的两条内引物含有限制性核酸内切酶的识别序列；
(2)将步骤(1)中的内引物与LAMP的外引物及扩增靶标杂交，并加入聚合酶和限制性核酸内切酶，将混合物孵育一段时间，消除反应管中的污染物；
(3)将混合物在高温条件下孵育一段时间，灭活反应管中的限制性核酸内切酶；
(4)将混合物置于适宜温度进行反应，最终得到大量的扩增产物。
2.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，所述步骤(1)中LAMP的两条内引物的上游内引物和下游内引物的序列中都含有一段限制性内切酶的酶识别位点序列。
3.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，所述步骤(3)中限制性内切酶将LAMP产物序列切断，使引物与切割产物之间在反应温度下无法结合延伸。
4.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，所述步骤(3)限制性内切酶的识别序列与切割位点不同，切割位点在识别序列的3’端之后。
5.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的孵育温度低于LAMP的反应温度。
6.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，所述步骤(4)中的高温条件要低于LAMP反应酶的失活温度。
7.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，若获得低温限制性核酸内切酶在升温到LAMP反应温度过程中便失活，所述步骤(3)省略。
8.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，所述步骤(5)中的适宜温度为LAMP反应温度。
9.根据权利要求1所述一种LAMP防污染的方法，其特征在于，所述LAMP防污染可替换为置换扩增反应、滚环扩增、环介导等温扩增技术、依赖解旋酶的扩增反应和基于变性泡介导的链置换扩增或其他等温核酸扩增方法中的任意一种。
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