[发明专利]一种快速高效固定化光合细菌的方法

权利要求书

1.一种光合细菌固定化方法，其特征在于光合细菌固定化方法为：

（1）将光合细菌在光合细菌液体培养基中光照厌氧条件下培养至对数生长期，固液分离弃去上清液，收集光合细菌菌体，再将菌体重新悬浮于无菌生理盐水，配得光合细菌细胞悬液；

（2）按照1:20~80的体积比将氢氧化铁胶体或氢氧化铝胶体加入到步骤（1）所得光合细菌细胞悬液中，调节pH值7~8，置于培养箱中在光强为1000lux~2000lux的条件下光照厌氧培养2~6天，培养温度为25~34℃培养，即获得固定化光合细菌;

所述氢氧化铁胶体按以下方法制备：取20~40mL 90℃去离子水至 200mL 容量的烧杯中，盖上表面皿置于磁力搅拌器上加热，待到水沸腾以后，打开磁力搅拌器中速搅拌，向沸腾的蒸馏水中逐滴加1~3mL饱和FeCl₃溶液，控制滴加速度在 4~5分钟内滴完，滴加完毕后停止搅拌，继续加热沸腾 1~3分钟，此后，将胶体冷却至60℃~70℃，并陈化一定时间使胶核长大；

所述氢氧化铝胶体按以下方法制备：将50mg氢氧化铝与50mL 0.1mol/L的稀盐酸混合，调节pH=3.6，80℃下恒温水浴下，回流反应12h，即可制得透明的氢氧化铝胶体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述光合细菌液体培养基终浓度组成为：酵母膏0.5 g/Ｌ、蛋白胨0.5 g/Ｌ、CH₃COONa 3 g/Ｌ、NH₄Cl 0.1 g/Ｌ、NaCl 0.5 g/Ｌ、NaHCO₃ 0.5 g/Ｌ、K₂HPO₄ 0.2 g/Ｌ、MgSO₄·7H₂O 0.1 g/Ｌ、CaCl₂ 0.1 g/Ｌ溶剂为水，初始pH 7~8。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述光合细菌为红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)光合细菌。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氢氧化铁胶体为经过纯化后的氢氧化铁胶体。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述纯化为将氢氧化铁胶体置于孔径为0.1~0.45μm的半透膜中进行纯化，取未能透过半透膜的液体。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述半透膜的制备方法为：取10~20mL火棉胶，倒入150mL干燥洁净的锥形瓶中，小心转动锥形瓶，使瓶内壁可以均匀铺展一层液膜，倾出多余的棉胶液，将锥形瓶倒置于铁圈上，待溶剂挥发完；同法涂上第2层、第3层、第4层，得1层、2层、3层和4层膜；将瓶口的薄膜脱开，在膜与容器壁之间注入水，使膜自动脱离瓶壁，即得所述半透膜，置于蒸馏水中待用。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述固液分离通过10000~12000r/min的转速下离心实现。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述光合细菌细胞悬液的浓度为每毫升生理盐水含有光合细菌细胞250~350个。