[发明专利]以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂

权利要求书

1. 以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂， 以地沟油作为培养基中的唯一碳源 ， 利用解脂耶氏酵母 Yarrowia lipolytica 为发酵菌种， 通过微生物法，实现赤藓醇和胞内油脂的高效产出。

2.根据权利要求 1 所述的以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂，其特征在于， 所述地沟油作为唯一碳源，在培养基中的添加量为 10~100g/L，优选为 30 g/L。

3.根据权利要求 1 所述的以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂，其特征在于， 所述以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂中所利用的菌种为解脂耶氏酵母 Yarrowia lipolytica，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种编号为 CGMCC2.1207。

4.根据权利要求 1 所述的以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂，其特征在于， 所述培养基中通过添加铜离子与锰离子来调控发酵，增加产物产量。

5.根据权利要求 4 所述的培养基中通过添加铜离子与锰离子来调控发酵，其特征在于，所述铜离子由硝酸铜提供，添加的量为 1~10 mg/L，优选为 4 mg/L，培养基中添加适量铜离子后，赤藓醇产量由原来的 0.54 g/g 碳源提高至 0.63 g/g碳源，胞内油脂产量由 0.47 g/g 细胞干重提高至 0.51g/g 细胞干重。

6.根据权利要求 4 所述的以培养基中通过添加铜离子与锰离子来调控发酵，其特征在于， 所述锰离子由硫酸锰提供，添加浓度为 1~15 mg/L，优选为10 mg/L， 赤藓醇产量由 0.63 g/g 碳源提高至 0.75 g/g 碳源，胞内油脂产量由0.51 g/g 细胞干重提高至 0.54 g/g 细胞干重。

7.根据权利要求 1 所述的以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂，其特征在于， 培养基成分为：地沟油作为唯一碳源，在培养基中的添加量为 10~100 g/L，优选为 30 g/L；渗透压调节剂为氯化钠，添加浓度为 0~100 g/L，优选为 60 g/L；发酵氮源为玉米浆，添加量为 1~5 g/L，优选为 2 g/L；磷酸盐为磷酸二氢钾，添加量为 1~5 g/L，优选为 1 g/L；镁离子由硫酸镁提供，添加量为 1~5 g/L，优选为 2 g/L；酵母粉添加量 0.25 g/L；铜离子由硝酸铜提供，添加的量为 1~10 mg/L，优选为 4 mg/L；锰离子由硫酸锰提供，添加浓度为 1~15mg/L，优选为 10 mg/L。

8.一种以权利要求 1 所述的以地沟油为主要原料联产制备赤藓醇和胞内油脂的方法，其特征在于， 包括：

菌株活化、种子培养、发酵联产、产物分离及纯化四个步骤；

1）将菌种由冻存的甘油管中划线至 YPD 平板，培养温度为 28~30℃，活化培养 48~72 h，用于种子接种和菌种保存，菌种于 YPD 斜面保存；

2）摇瓶发酵条件为：摇瓶培养体积为 50 mL，接种量为 1×106~1×109个细胞/L 培养基，培养温度 26~36℃，培养转速 150~220 rpm，优选为 200 rpm；培养时间为 3~10 天；

3）发酵罐发酵条件为：发酵体系 5 L，发酵温度为 28ºC，转速为 250 rpm，通气量为 1.0 l/min/l 培养体积，菌体接入量为 1.0×108个酵母细胞/L 培养基，发酵时间为 7 天；

4）发酵地沟油联产赤藓醇及微生物油脂的方法中，赤藓醇与胞内油脂两种产物的初步分离采用离心法；

5）发酵地沟油联产赤藓醇及微生物油脂的方法中，按照常规方法分别提取发酵液中的赤藓醇及细胞内的油脂。