[发明专利]一种凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及水产养殖的技术领域，尤其涉及一种凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽及其应用。

背景技术

近年来，随着经济的发展，人们对水产品的需求日益增加，在捕捞量不能满足市场需求的情况下，水产养殖业得到了迅猛的发展。对虾是水产养殖中增长最快的产品之一，我国是养殖对虾年产量最高的国家。然而，与国际对虾养殖业相比，我国、我省对虾养殖业相对效益较低、发展后劲不足，可持续发展前景不容乐观。究其原因，主要与目前我国对虾养殖病害频发和生物安全所致对虾出口屡遭贸易壁垒等有关。

血蓝蛋白又称血蓝素，是一种多功能蛋白，过去被称为呼吸蛋白，它是位于节肢动物和软体动物血淋巴中的含铜呼吸蛋白，是节肢动物和软体动物血淋巴中发现的含铜的蓝绿色高分子量蛋白质，是氧的传递体，并且是已知的能与氧气可逆结合的唯一铜蛋白。

抗菌肽(Antibac-terial peptide)又叫抗微生物肽(Antimicrobial pep-tide)、抗生素肽(Antibiotics peptide)，是由多种生物细胞特定基因编码经外界条件诱导产生的一类具有广谱抗细菌、真菌、病毒、原虫、抑杀肿瘤细胞等活性作用的多肽。迄今为止，国内外报道大约有2000多种抗菌肽被鉴定、分离出来，以天然抗菌肽作模板进行人工合成的模拟肽已达数千种。在生物界自然存在的抗菌肽根据其结构的不同可以分为四大类：β折叠型抗菌肽、α螺旋型抗菌肽、延伸结构型多肽和loop结构型多肽。

目前，我国对虾养殖业急需解决的共性关键问题包括：对虾传染性疫病的防控、品种的选育、营养研究、养殖环境控制以及对虾加工技术升级等。而要成功解决这些问题，阐明对虾免疫防御机制是前提和基础。有鉴于此，本发明人研究和设计了一种凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽及其应用，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽及其应用，通过凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽B2构效关系的研究，为寻找新的对虾病害防控、良种选育的策略提供思路，促进我国对虾养殖业的健康、持续发展。

为了解决上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

作为实施例的优选方式，所述抗菌肽的分子量为1837Da。

一种凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽的应用，在制备治疗或预防细菌的药物中的应用。

作为实施例的优选方式，所述细菌包括河弧菌、溶藻酸弧菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、乙型链球菌和金黄色葡萄球菌。

本发明以凡纳滨对虾血蓝蛋白为研究对象，通过圆二色谱对11种凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽进行结构测定，选择具有空间结构的一种肽段B2进行深入研究。先通过抑菌试验验证其抑菌活性，再利用核磁共振的方法获得血蓝蛋白抗菌肽B2的核磁图谱，利用MestReNova软件将图谱进行解析，从而验证抗菌肽B2的结构。实验结果表明，抗菌肽B2肽段具有α-螺旋和β-转角结构，这两种结构的存在可能对其抑菌活性具有影响。本发明为进一步研究凡纳滨对虾的免疫防御机制提供了基础。

附图说明

图1为本发明的B2肽段3D模型；

图2为本发明的B2肽段3D模型；

图3为本发明的B2的化学结构；

图4为本发明的B2肽段核磁共振谱-HMBC谱；

图5为本发明的B2肽段核磁共振谱-NOESY谱上标记点①；

图6为本发明的B2肽段核磁共振谱-NOESY谱标记点②；

图7为本发明的B2肽段可能的空间结构。

具体实施方式

实施例1凡纳滨对虾血蓝蛋白抗菌肽的预测

首先运用AntiBP Server、CAMP、APD2三个在线预测软件，预测凡纳滨对虾血蓝蛋白大、小亚基抗菌肽段，如表1、表2所示，总共预测得到34条可能具有抗菌活性的小分子片段，其中11条多肽序列(黑体加粗表示)可能会形成α螺旋结构，且能与病原菌膜相互作用而发挥抑菌作用，这些预测多肽分子量大小范围为1.5～1.9kDa。另外，预测结果显示，在血蓝蛋白N端的α螺旋域、C端的Ig-like域以及中间部分的保守铜离子结合域均有活性片段，其中铜离子结合域和Ig-like域占主要区域。

表1凡纳滨对虾血蓝蛋白大亚基抗菌肽段的预测