[发明专利]N,N‑二（2‑羟乙基）芘甲酰胺及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种测定pH值的方法，其特征在于：步骤为：

1)制作标准曲线Ι：将N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺加入不同pH值的缓冲溶液中，配制成相同浓度的N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺溶液，记录各溶液的荧光强度，确定pH值与404nm处荧光强度的定量关系；

2)制作标准曲线Ⅱ：将N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺加入不同pH值的缓冲溶液中，配制成相同浓度的N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺溶液，记录各溶液的荧光强度，确定pH值与484nm处荧光强度的定量关系；

3)制作标准曲线Ⅲ：将N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺加入不同pH值的缓冲溶液中，配制成相同浓度的N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺溶液，记录各溶液的荧光强度，确定pH值与484nm和404nm处荧光强度的比值I₄₈₄/I ₄₀₄的定量关系；

4)检测记录：将N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺加入待测溶液中，配制成相同浓度的N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺溶液，记录溶液的荧光强度；

5)计算：根据定量关系计算待测溶液的pH值；

所述N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺的结构式为：

该测定pH值的方法不包括疾病的诊断或治疗方法。

2.根据权利要求1所述的一种测定pH值的方法，其特征在于：步骤1)中，在激发波长为350nm，测定N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺溶液在发射波长为404nm处的荧光强度与pH值变化的定量关系。

3.根据权利要求1所述的一种测定pH值的方法，其特征在于：步骤2)中，在激发波长为350nm，测定N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺溶液在发射波长为484nm处的荧光强度与pH值变化的定量关系。

4.根据权利要求1所述的一种测定pH值的方法，其特征在于：步骤3)中，在激发波长为350nm，记录发射波长为404nm和484nm处的荧光强度，分别测定N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺溶液荧光强度的比值I₄₈₄/I ₄₀₄与pH值变化的定量关系。

5.根据权利要求1所述的一种测定pH值的方法，其特征在于：所述N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺的合成方法，包括以下步骤：

1)将芘甲醛与KMnO₄于有机溶剂中混合，加热至75～85℃反应3～4h，反应完成后，冷却过滤，调节滤液的pH为8.5，分液，取水相溶液，调节水相溶液的pH值为2.0，过滤得到沉淀，干燥沉淀后得到芘甲酸；

2)将芘甲酸溶解于SOCl₂中，加热至68～72℃回流2～3h，反应完成后，旋干溶剂，干燥，得到芘甲酰氯，将芘甲酰氯溶解到有机溶剂中，再加入二乙醇胺，室温搅拌反应2～3h，停止反应后，水洗，分液，将有机层旋干并干燥，将得到的粗产物进行柱层析分离提纯，得到N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺；

合成方法的步骤1)中，芘甲醛与KMnO₄的质量比为1:(2.2～2.5)；合成方法的步骤2)中，芘甲酸与SOCl₂的用量比为1g:(4～6)mL；芘甲酸与二乙醇胺的质量比为1:(1.3～1.7)。

6.N,N-二(2-羟乙基)芘甲酰胺在制备pH荧光探针中的应用。