[发明专利]一种大规模生产高纯度猪圆环病毒ORF2蛋白的方法

权利要求书

1.一种大规模生产高纯度猪圆环病毒ORF2蛋白的方法，其特征在于，包括如

下步骤：

（1）取猪圆环病毒ORF2蛋白培养液，加入壳聚糖摇匀后自然沉降，吸取上清作为待澄清蛋白液；

（2）将步骤（1）所得待澄清蛋白液利用中空纤维柱澄清过滤，得到猪圆环病毒ORF2蛋白澄清液；所述中空纤维柱的孔径为0.2μm~0.65μm；所述待澄清蛋白液利用中空纤维柱澄清过滤的具体操作过程为：先透过50%~70%待澄清蛋白液，然后补加体积与剩余待澄清蛋白液体积相同的20mmol/L Tris溶液，继续透过，待透过的体积等于加入的Tris溶液体积后，再补加体积与剩余蛋白液体积相同的20mmol/L Tris溶液，如此洗滤多次后，直至残渣不能透过，结束澄清过滤过程；

（3）将步骤（2）所得猪圆环病毒ORF2蛋白澄清液利用离子交换柱进行离子交换，随后洗脱，得到猪圆环病毒ORF2蛋白纯化洗脱液；所述离子交换柱的填料为Capto SP ImpRes；所述利用离子交换柱进行离子交换时，猪圆环病毒ORF2蛋白澄清液的上样线性流速为30~100cm/h，压力控制小于2.50bar，上样量控制在70~80mg/ml BSA；洗脱采用的洗脱液为0.5~2mol/L NaCl 溶液，洗脱流速为30~100cm/h；

（4）将步骤（3）所得的猪圆环病毒ORF2蛋白纯化洗脱液利用G25层析柱脱盐，洗脱后得到猪圆环病毒ORF2蛋白纯化液；所述G25凝胶层析柱的填料为：SepHadex G-25；所述利用G25层析柱脱盐时，猪圆环病毒ORF2蛋白纯化洗脱液的上样线性流速为45~100cm/h，压力小于2.0bar，上样量控制在10%~30%柱体积，洗脱采用的洗脱液为0.01mol/L PBS溶液；

（5）步骤（4）所得蛋白纯化液除菌过滤后，即得高纯度猪圆环病毒ORF2蛋白液。

2.根据权利要求1所述的大规模生产高纯度猪圆环病毒ORF2蛋白的方法，其

特征在于，步骤（1）中所述壳聚糖的加入量为猪圆环病毒ORF2蛋白培养液质量的1%~10%。

3.根据权利要求1所述的大规模生产高纯度猪圆环病毒ORF2蛋白的方法，

其特征在于，步骤（2）所述中空纤维柱澄清过滤时采用的TMP在2.0~3.0psi，进液端流速控制在60~80L/min。

4.根据权利要求1所述的大规模生产高纯度猪圆环病毒ORF2蛋白的方法，

其特征在于，步骤（2）所述中空纤维柱的型号为：CFP-2-E-55；步骤（3）所述离子交换柱的型号为：BPG300/500 Column；步骤（4）所述G25凝胶层析柱的型号为：BPG450/1000Column。