[发明专利]一种检测靶向CD33的CART细胞中CAR表达的荧光定量试剂盒

权利要求书

1.一种检测靶向CD33的CAR T细胞中CAR表达的荧光定量试剂盒，所述CAR T细胞中转染了带有编码CD33SCFV的CAR核酸片段的表达载体质粒，并且所述编码CAR核酸的序列如SEQ ID NO:7所示，其特征在于，包括第一引物探针组和第二引物探针组，所述第一引物探针组中包括SEQ ID NO:1所示的探针1以及SEQ ID NO:2所示的引物1F和SEQ ID NO:3所示的引物1R，所述第二引物探针组中包括SEQ ID NO:4所示的探针2以及SEQ ID NO:5所示的引物2F和SEQ ID NO:6所示的引物2R，所述探针1和探针2都为TaqMan探针。

2.根据权利要求1所述的荧光定量试剂盒，其特征在于，所述探针1和探针2的5’端均带有荧光基团5-FAM，3’端均带有淬灭基团6-TAMRA。

3.根据权利要求1或2所述的荧光定量试剂盒，其特征在于，还包括标准品、阳性对照样品和阴性对照样品，其中所述标准品为包含定量所述表达载体质粒的样品，所述阳性对照样品为含有SEQ ID NO:7所示序列的DNA样品，所述阴性对照样品为不含SEQ ID NO:7所示序列的DNA样品。

4.一种检测靶向CD33的CAR T细胞中CAR表达的方法，其特征在于，采用如权利要求3所述荧光定量试剂盒实现所述方法，包括以下步骤：

S1：从CAR T细胞提取RNA并反转录成cDNA；

S2：将所述cDNA分别与所述第一引物探针组和第二引物探针组加上荧光定量PCR试剂构成第一荧光定量PCR体系和第二荧光定量PCR反应体系；

S3：进行荧光定量PCR反应，并通过所述荧光定量PCR反应的数据确定CAR T细胞中的CAR表达量。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在S2前进行步骤S4：使用梯度稀释的所述标准品制作标准曲线。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在S2中还分别使用所述阳性对照和阴性对照样品配制了阳性对照PCR体系和阴性对照PCR体系，并且所述阳性对照PCR体系和阴性对照PCR体系在S3中与所述第一荧光定量PCR体系和第二荧光定量PCR反应体系在同一荧光定量PCR仪中进行荧光定量PCR反应。