[发明专利]一种检测降钙素原的免疫比浊试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫领域，特别涉及一种检测降钙素原的免疫比浊检测试剂盒。

背景技术

降钙素原(procalcitonin，PCT)是一种糖蛋白，由116个氨基酸组成，分子量约为13Kd，其结构稳定，不受体内激素活性的影响，在人体内的半衰期为25-30h，稳定好比较好。PCT主要由肝脏产生，同时脾、肾、肺的神经内分泌细胞也是其产生的重要场所。

PCT是一种临床标志物，是诊断和监测细菌炎性疾病感染的一个重要参数。广泛应用于血液肿瘤科、麻醉科、内科、移植外科、新生儿科和儿科等诊疗科室。在正常情况下，PCT以游离形式存在于人体血清中，其水平含量很低，一般低于0.1ng/ml，0.5ng/ml是全身性感染(脓毒症)诊断的分界值，脓毒症患者PCT含量明显升高，当严重细菌、真菌、寄生虫感染及脓毒症和多脏器功能衰竭时，PCT在血浆中的水平升高，自身免疫、过敏和病毒感染时，PCT不会升高，局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高。PCT的测定可以预示为：作为一个急性的参数来鉴别诊断细菌性和非细菌性感染和炎症；监测有感染危险的患者(如外科术后和器官移植后免疫抑制期，多处创伤)以及需要重症监护患者，用来探测细菌感染的全身影响或检测脓毒性并发症；评价严重炎症性疾病临床进程及预后，如腹膜炎、脓毒症、SIRS和MODS等。

目前，对于PCT的检测方法有很多种，既有定性检测，也有定量分析检测。其中，常用检测方法有放射免疫学分析法、高效液相色谱分析法、酶联免疫吸附分析法、双抗夹心免疫化学发光法，胶体金比色法和透射免疫比浊法等。放射免疫学分析法可以检测正常人的血清PCT，但是不能区分游离PCT、结合型PCT和降钙素基因相关肽前体三种物质，而且耗时太长(19-22h)，在临床应用中有一定局限性；高效液相色谱分析法既耗时，又不易自动化；酶联免疫吸附法操作复杂，需较多时间，一般为定性或半定量，结果偏差较大；化学发光法具有高灵敏度的优点，能满足临床PCT检测要求，但其需要匹配专门仪器，价格昂贵；胶体金比色法为定性检测，快速简便，能得出PCT浓度范围，但不能得到准确值。透射免疫比浊法是一种比较稳定的PCT检测方法，该测定方法简单、快速、可自动化，但由于方法的局限性，现有公开的采用这种检测原理的比浊试剂盒存在检测低限灵敏度不高、线性范围较窄的问题，并且需要以血清或血浆为待测样本进行检测，在检测之前，需要对血液进行分离处理，提取血清或血浆，操作冗杂，费时费力。而且，获得血清或血浆时需要大量的采集静脉血，无疑增加了受试者的痛苦且不适合某些采血困难的特殊患者，如儿童患者尤其是婴幼儿和大面积烧烫伤人群。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种检测降钙素原的免疫比浊检测试剂盒，使得该试剂盒能够以全血作为测试样本进行检测，并且获得较高的灵敏度和较宽的线性范围。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供的降钙素原的免疫比浊检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；试剂R1由缓冲液A和溶血剂组成；试剂R2由缓冲液B和聚苯乙烯乳胶微球-降钙素原抗体复合物组成；聚苯乙烯乳胶微球由80nm～150nm和150nm～400nm的两种不同粒径的微球组成。

其中，聚苯乙烯乳胶微球-降钙素原抗体复合物中，降钙素原抗体与聚苯乙烯乳胶微球通过共价偶联和物理吸附方式连接。聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、醛基、酰肼，因此，聚苯乙烯乳胶微球可通过氨基、羧基、醛基、酰肼与降钙素原抗体共价偶联，优选通过羧基共价偶联。

本发明提供的试剂盒中，聚苯乙烯乳胶微球的粒径优选为80nm～150nm和150nm～400nm的粒径组合，更优选为80nm和198nm的组合，123nm和220nm的组合或107nm和309nm的组合。

优选的，本发明试剂盒中，所述溶血剂选自十二烷基三甲基氯化铵、SDS、吐温80和曲拉通X-100中的一种或两者以上的混合物。

优选的，本发明试剂盒中，所述缓冲液A和所述缓冲液B独立选自Tris-HCL缓冲液、PBS缓冲液、MOPS缓冲液、Hepes缓冲液和甘氨酸缓冲液中的一种或多种，pH为7.4-9.0，浓度优选为20-250mmol/L。

优选的，本发明试剂盒中，所述降钙素原抗体选自羊抗人降钙素原、鼠抗人降钙素原和兔抗人降钙素原中的一种或多种。

优选的，本发明试剂盒中，所述试剂R1还包括稳定剂A、保护剂A、防腐剂A和增凝剂；所述试剂R2还包括稳定剂B、保护剂B和防腐剂B。